Asam oleanolic telah digunakan hanya sebagai agen tambahan dalam produk kosmetik. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menunjukkan pengaruh asam oleanolat sebagai bahan aktif untuk pengurangan kerutan pada manusia dan untuk mengembangkan formulasi misel polimer yang memungkinkan asam oleanolat yang sukar larut digunakan sebagai bahan utama dalam produk kosmetik untuk mengurangi kerutan. . Kelarutan asam oleanolat dievaluasi dalam pelarut, surfaktan, dan polimer. Ukuran partikel dan bentuk misel polimer yang mengandung asam oleanolat dievaluasi dengan spektrofotometer hamburan cahaya elektroforesis dan kriomikroskopi elektron pemindaian. Efisiensi enkapsulasi dan permeasi kulit diukur dengan HPLC. Stabilitas misel polimer yang disimpan pada suhu 40 °C selama 3 bulan dievaluasi dengan pengamatan visual, pengukuran ukuran partikel, dan pengukuran kadar asam oleanolat. Misel polimer dalam bentuk ampul produk akhir diaplikasikan di sekitar mata 23 subjek wanita selama 8 minggu. Lima parameter kulit dievaluasi dengan profilometri optik setiap 4 minggu selama 8 minggu. Selain itu, para profesional membuat pengamatan visual pada kulit dan studi iritasi kulit manusia dilakukan. Misel polimer asam oleanolat dengan ukuran partikel kurang dari 100 nm dibuat menggunakan Capryol 90® dan poloxamer. Laju permeasi kulit asam oleanolat dalam misel polimer lebih tinggi dibandingkan dengan larutan lain yang terbuat dari asam oleanolat yang terdispersi dalam 2 surfaktan yang berbeda. Tidak ada perubahan signifikan dalam ukuran partikel, warna, atau kandungan asam oleanolic yang diamati, dan misel polimer yang disimpan pada suhu 40 °C selama 3 bulan tidak mengalami pemisahan fase. Setelah 8 minggu aplikasi, iritasi kulit tidak berkembang dan kelima parameter dievaluasi dengan profilometri optik serta skor evaluasi visual meningkat secara signifikan. Penelitian ini menunjukkan bahwa misel polimer asam oleanolat yang dibuat dalam penelitian ini stabil dan efektif dalam mengurangi kerutan pada manusia sebagai bahan aktif utama. Berdasarkan temuan tersebut, diharapkan misel polimer asam oleanolat dapat digunakan secara luas dalam aplikasi kosmetik.
Penuaan kulit termasuk kendur (laxity), penipisan, dan kerutan. Ini dapat dipercepat oleh infeksi, merokok, sinar UV, trauma, ketidakseimbangan hormon, stres, dan/atau pro-oksidan seperti hidrolase termasuk elastinase atau kolagenase [1]. Spesies oksigen reaktif atau radikal bebas yang dihasilkan oleh penyebab yang disebutkan di atas merusak sel-sel tetangga dan mengakibatkan berkurangnya elastisitas dan penipisan kulit [2, 3]. Terutama, sinar UV diketahui memicu pembentukan spesies oksigen reaktif, yang merusak lipid membran, protein seluler, dan DNA, dan dengan demikian mempercepat perkembangan ekspresi kerutan, bintik, dan melasma [1,2,3,4]. Asam oleanolat adalah komponen efektif yang berasal dari tumbuhan alami yang diekstraksi dari beberapa spesies tumbuhan dan digunakan sebagai bahan medis dan kosmetik utama. Hal ini juga ditemukan dalam buah-buahan seperti apel atau pir [5]. Sebagai sejenis hidroksi pentasiklik terpene, asam oleanolat pertama kali diisolasi dari zaitun (Olea europaea ) daun dan ditemukan secara luas pada tumbuhan termasuk swertia Asia Timur (Eugenia jambos ) dan gentian kuning (Gentiana lutea ). Ini mempromosikan fungsi anti-penuaan melalui sintesis tidak hanya pro-kolagen, yang penting untuk sintesis kolagen, tetapi juga ceramide dan filaggrin, dan juga dengan menghambat aktivitas MMP-1, enzim yang memecah protein seperti kolagen [ 5, 6]. Berdasarkan temuan ini, dapat diasumsikan bahwa asam oleanolat memiliki efek anti-penuaan ganda dengan tidak hanya meningkatkan produksi kolagen tetapi juga mencegah degradasi kolagen [7]. Akibatnya, asam oleanolic adalah bahan anti-penuaan yang sangat menjanjikan untuk produk kosmetik. Namun, penggunaan asam oleanolat dalam produk kosmetik sebagai bahan utama dibatasi oleh kelarutannya dalam air yang buruk; dengan demikian, hanya sejumlah kecil asam oleanolat sebagai bagian dari formulasi emulsi yang telah digunakan sebagai bahan tambahan dalam produk kosmetik [8]. Sifat fisikokimia yang berhubungan dengan penyerapan kulit meliputi titik leleh, berat molekul, koefisien partisi, dan hidrofilisitas. Titik lelehnya lebih tinggi dari 300 °C, menunjukkan bahwa itu adalah bahan yang sangat kristal. Bahan yang sangat kristalin membutuhkan energi yang lebih besar untuk disolusi, menunjukkan bioavailabilitas yang buruk karena kelarutannya yang terbatas dan oleh karena itu diserap dengan buruk [9]. Selain itu, senyawa yang sangat hidrofilik atau lipofilik, atau senyawa dengan berat molekul tinggi diketahui tidak mudah menembus kulit [10, 11]. Metode yang paling sering digunakan untuk meningkatkan permeasi kulit dari molekul tersebut adalah sintesis prekursor atau penggunaan pembawa obat koloid. Dalam hal ini, liposom, emulsi, dan misel polimer telah dipelajari secara aktif [12].
Misel polimer adalah agregat skala nano yang dirakit sendiri yang membentuk struktur cangkang inti dalam larutan berair. Misel polimer sering dibuat dari kopolimer di-blok atau tri-blok yang dapat membentuk inti dalam hidrofobik dan kulit luar hidrofilik [13, 14]. Misel polimer dianggap lebih stabil secara fisik daripada misel surfaktan karena sifat misel polimer bervariasi tergantung pada jenis dan rasio monomer polimer dalam kopolimer blok dan memiliki konsentrasi misel kritis yang relatif rendah [15, 16].
Dalam penelitian ini, kami menyiapkan misel polimer asam oleanolat dan mengevaluasi ukuran dan bentuk partikelnya, dan efisiensi enkapsulasi yang dihasilkan dan tingkat permeasi kulit asam oleanolat. Stabilitas fisik asam oleanolat dalam bentuk ini juga dievaluasi selama 3 bulan. Efek anti-kerutan asam oleanolic pada manusia dalam formulasi produk kosmetik sebenarnya juga diselidiki.
Asam oleanolic, Tween 80, Tween 20, dan Tween 60 dibeli dari TCI (Tokyo, Jepang). PEG 400, Pluronic F127, dan Pluronic F68, diperoleh dari BASF (Ludwigshafen, Jerman). Propilen glikol, PEG 300, dan PEG 200 diperoleh dari JUNSEI (Tokyo, Jepang). TRANSCUTOL P, LABRASOL, LAUROGLYCOL FCC, LABRAFAC, Capryol® 90, dan Capryol™ PGMC dibeli dari Gattefossé (Lyon, Prancis). Disodium EDTA (Daejung Chemical &Metals Co., Ltd., Siheung, Korea), allantoin (Sigma Aldrich, St. Louis, MI, USA), dipropylene glycol (Daejung Chemical &Metals Co., Ltd., Siheung, Korea), propanediol (DuPont Tate &Lyle Bio Products Company, LLC, Loudon, USA), carbomer (The Lubrizol Corporation, Ohio, USA) PEG/PPG/polybutylene glycol-8/5/3 gliserin (NOF Corporation, Tokyo, Jepang), sodium hyaluronate (TCI, Tokyo, Jepang), beta-glukan (SK Bioland, Cheonan, Korea), phenoxyethanol (Daejung Chemical &Metals Co., Ltd., Siheung, Korea), kaprilil glikol (J TWO K BIO CO., Ltd. , Cheongju, Korea), dan etilheksilgliserin (J TWO K BIO CO., Ltd., Cheongju, Korea) digunakan untuk membuat produk kosmetik yang mengandung asam oleanolat. HPLC kelas asetonitril diperoleh dari Burdick &Jackson (Muskegon, MI, USA). Air suling tiga kali digunakan, dan pelarut dan reagen lainnya adalah kelas EP dan GR. Crlori:Tikus betina tidak berbulu SKH1 jam dibeli dari OrientBio (Seongnam, Korea).
Asam oleanolat dianalisis menggunakan HPLC seri Shimadzu LC-30 (Shimadzu Corporation, Kyoto, Jepang). Kromasil 100 C18 250 mm × 4,6 mm, 5 μm, kolom analitis (Teknokroma, Barcelona, Spanyol) digunakan pada suhu sekitar. Fase gerak terdiri dari asetonitril dan air (85:15, v/v), laju alir 1 mL/menit, dan volume injeksi 10 μL. Asam oleanolic dianalisis pada UV λ =210 nm. Semua pengukuran dilakukan pada suhu sekitar [17].
Sejumlah asam oleanolat yang diukur ditambahkan ke pelarut, diaduk pada 60 °C selama 48 jam, dan disonikasi selama 5 min menggunakan pembersih ultrasonik. Suspensi disentrifugasi pada 2000 rpm menggunakan sentrifugal Universal 320R (Hettich, Tuttlingen, Jerman), dan supernatannya kemudian dikumpulkan. Kemudian supernatan disaring melalui filter membran PVDF 0,45 μm (Whatman, Kent, UK). Kelarutan asam oleanolat dalam pelarut yang sesuai diperkirakan dengan mengurangkan berat sisa padatan dari jumlah berat awal asam oleanolat dan pelarut (Tabel 1).
Studi optimasi formulasi dilakukan dengan menggunakan poloxamer 188, poloxamer 407, Tween 60, dan Tween 80. Berbagai perbandingan polimer amfifilik dan surfaktan dicobakan sebagaimana dirangkum dalam Tabel 2. Masing-masing asam oleanolat dan Capryol® 90 ditimbang, dipanaskan, dan diaduk pada lebih dari 60 ° C sampai solusi yang jelas diamati. Polimer/surfaktan yang ditunjukkan pada Tabel 2 kemudian ditambahkan ke dalam larutan bening dan diaduk pada suhu lebih dari 60°C sampai larutan bening diamati. Solusinya kemudian didispersikan dalam air suling (Gbr. 1). Solusi yang dihasilkan dibiarkan selama kurang lebih 48 jam, dan inspeksi visual kemudian dilakukan untuk memilih formulasi yang optimal. Hasil inspeksi visual setiap formulasi pada Tabel 2, termasuk pengamatan presipitasi, pemisahan fasa, transparansi, dan gelasi, dirangkum dalam Tabel 3.
Representasi skematis dari pembuatan misel asam oleanolat
Misel polimer asam oleanolat (PMO) dibuat menggunakan formulasi G dan H pada Tabel 2 menggunakan metode yang ditunjukkan pada Gambar. 1. PMO-G dan PMO-H digunakan untuk eksperimen selanjutnya dan PMO-H dalam produk kosmetik untuk uji klinis.
Miselisasi polimer ketika formulasi G atau formulasi H didispersikan dalam air dikonfirmasi dengan pengamatan visual, yaitu transparansi. Pembentukan PMO (PMO-G atau PMO-H) juga dikonfirmasi dengan uji noda. Metilen biru ditambahkan ke dalam campuran air dan Capryol® 90, air, Capryol® 90, PMO-G, dan PMO-H dan warna larutan diamati dan difoto secara visual.
Teknik ELS (electrophoretic light scattering) mengukur fluktuasi intensitas hamburan dari partikel sebagai fungsi waktu ketika partikel menunjukkan gerak Brown acak dan gerak elektroforesis berorientasi dalam medan listrik yang terdefinisi dengan baik. Mobilitas elektroforesis partikel diukur dengan teknik ELS [18] dan memungkinkan ukuran partikel PMO-G dan PMO-H dievaluasi menggunakan spektrofotometer hamburan cahaya elektroforesis (ELS-Z, Photal, Otsuka Electronics, Jepang).
Mikroskop elektron pemindaian kriogenik atau pemindaian kriomikroskopi elektron (cryo-SEM) adalah teknik yang ampuh untuk memvisualisasikan keadaan struktur mikro atau struktur nano suspensi atau dispersi polimer koloid setelah mereka diimobilisasi dengan pembekuan cepat dan retak untuk pencitraan. Fraktur dibuat dan diperiksa pada -196 °C, titik didih normal nitrogen cair dan jauh di bawah suhu transisi gelas dari partikel curah dan partikel yang menyatu sepenuhnya. Gambar Cryo-SEM mengungkapkan berbagai respons partikel terhadap patahan yang merambat melewatinya melalui es [19]. Pemindaian kriomikroskopi elektron (Tescan Mira 3 LMU FEG/Quorum Technologies PP3000T Cryo-SEM Sample Preparation System) digunakan untuk mengamati bentuk PMO.
Efisiensi enkapsulasi misel polimer asam oleanolat dievaluasi. PMO disentrifugasi pada 2000 rpm selama 15 min, dan supernatan dikumpulkan dan dianalisis dengan HPLC. Efisiensi enkapsulasi dihitung sebagai jumlah asam oleanolat dalam misel polimer dibagi dengan jumlah asam oleanolat yang awalnya ditambahkan (mg) selama preparasi PMO.
$$ \mathrm{Enkapsulasi}\ \mathrm{efisiensi}\ \left(\%\right)=\kern0.37em \frac{\mathrm{Jumlah}\ \mathrm{of}\ \mathrm{oleanolic}\ \mathrm {acid}\ \mathrm{in}\ \mathrm{polymeric}\ \mathrm{micelle}\ \left(\mathrm{mg}\right)}{\mathrm{Jumlah}\ \mathrm{of}\ \mathrm{ oleanolic}\ \mathrm{acid}\ \mathrm{in}\mathrm{awalnya}\ \mathrm{ditambahkan}\ \left(\mathrm{mg}\right)}\times 100 $$Stabilitas fisik PMO-H dievaluasi dengan menyimpannya pada suhu 40 °C selama 3 bulan. Perubahan warna, pemisahan fasa, adanya endapan, dan perubahan kekeruhan dievaluasi secara visual. Sampel PMO-H yang diambil pada interval waktu yang teratur dianalisis dengan HPLC untuk menentukan jumlah asam oleanolat yang tersisa dan dengan ELS-Z untuk menentukan ukuran partikel PMO-H. Hasilnya disajikan pada Gambar. 9
Sebuah studi perembesan kulit in vitro dilakukan dengan menggunakan sel difusi Franz untuk menyelidiki peningkatan permeasi kulit asam oleanolic. Pengujian dilakukan terhadap PMO-G, PMO-H, campuran asam oleanolat dan Tween 80 yang terdispersi dalam aquades, dan campuran asam oleanolat dan propilen glikol yang terdispersi dalam aquades. Kulit tikus betina tidak berbulu berumur 6 minggu dipotong-potong sesuai ukuran yang diinginkan. Sel Franz vertikal digunakan, dan kulit difiksasi di antara dua ruang dengan stratum korneumnya menghadap ke atas. 330 μl dari formulasi yang dipilih diaplikasikan pada kulit dan sel Franz ditutup dengan parafilm. Reseptor diisi dengan larutan PBS (pH 7.4) dan etanol dengan perbandingan 9:1 (v/v). Larutan reseptor diisi ulang dengan larutan PBS segar pada setiap waktu pengambilan sampel. Sampel ditarik pada 2, 4, 6, 8, 10, 20, dan 24 h dan dianalisis dengan HPLC. Setelah 24 jam, formulasi berlebih yang tersisa di kulit dihilangkan dengan Kimwipes (Profesional Kimberly-Clark, NSW, Australia). Kulit yang digunakan dalam studi permeasi dibersihkan dengan larutan PBS dan asam oleanolat yang tersisa di kulit diukur dengan HPLC. Semua eksperimen permeasi dilakukan dalam rangkap tiga.
Eksperimen telah dilakukan dalam tiga pengulangan secara independen, dan hasil penelitian ini dilaporkan sebagai mean ± SD. Analisis statistik diverifikasi oleh t . independen tes, dan nilai p <0,05 dianggap signifikan secara statistik.
Untuk uji klinis, PMO-H digunakan sebagai produk uji. PMO-H, air murni, disodium EDTA, allantoin, dipropylene glycol, propanediol, carbomer, dan PEG/PPG/polybutylene glycol-8/5/3 gliserin ditambahkan dan diaduk selama 10~15 min menggunakan magnetic stirrer, dan kemudian kalium hidroksida ditambahkan dan campuran diaduk lebih lanjut selama 5~10 min. Setelah bahan tercampur secara homogen, natrium hialuronat dan beta-glukan ditambahkan dan diaduk selama 2~5 menit lebih lanjut, dan kemudian fenoksietanol, propanediol, kaprilil glikol, dan etilheksilgliserin ditambahkan dan diaduk selama 2 ~ 5 menit. Formula akhir ditambahkan ke ampul sebagai produk uji. Gelembung udara ampul dihilangkan menggunakan oven vakum kering sebelum digunakan tes. Kontrol disiapkan mengikuti metode yang sama untuk produk uji kecuali asam oleanolat yang dikeluarkan.
Tes tempel kulit produk kosmetik, yang mengandung PMO-H dalam ampul, dilakukan pada 25 subjek pria dan wanita berusia 22 hingga 56 tahun yang telah setuju untuk berpartisipasi dalam tes iritasi kulit manusia. Setiap zat uji dijatuhkan ke lengan atas dan difiksasi dengan tambalan. Patch dipasang selama 24 jam dan tingkat stimulasi diamati oleh 2 profesional 30 menit, 24 jam, dan 48 jam setelah pelepasan patch sesuai dengan kriteria International Contact Dermatitis Research Group (ICDRG).
Misel polimer yang mengandung asam oleanolat dalam ampul sebagai bentuk produk akhir diterapkan di sekitar mata dari 23 subjek wanita berusia 30 hingga 65 tahun yang telah setuju untuk berpartisipasi dalam tes perbaikan kerutan. Subyek memenuhi kriteria inklusi dan tidak ada kriteria eksklusi dan setuju untuk berpartisipasi dalam tes aplikasi manusia. Metode double-blind diikuti oleh peneliti dan subjek uji. Pengujian dilakukan selama 8 minggu, dan evaluasi dilakukan setiap 4 minggu. Metode double-blind dan alokasi acak digunakan. Produk uji dan kontrol diterapkan secara terpisah secara acak ke sisi kiri atau kanan wajah subjek yang sama. Lima parameter dievaluasi dengan profilometri optik menggunakan Skin Visiometer SV 700 (Courage + Khazaka electronic GmbH, Cologne, Germany) setiap 4 minggu selama 8 minggu—kekasaran rata-rata (R3) adalah titik akhir utama, dan empat parameter kekasaran kulit (R1) , kekasaran maksimum (R2), kedalaman kehalusan (R4), dan kekasaran rata-rata aritmatika (R5) adalah titik akhir sekunder. Peningkatan atau penurunan lima parameter pada area subjek yang sama diukur dari waktu ke waktu, dan nilai rata-rata kenaikan atau penurunan dari lima parameter dihitung dan dibandingkan antara perlakuan produk kontrol dan uji. Selain itu, pengamatan visual kulit dilakukan oleh para profesional. Foto kerutan mata diambil menggunakan Janus 1 Mark II (PIE Co., Ltd., Suwon, Korea). Kriteria yang digunakan untuk menentukan skor evaluasi visual ditunjukkan pada Gambar. S1, dan hasil visual disajikan pada Gambar. 13. Parameter dibandingkan dan dianalisis menggunakan sampel berpasangan t uji dengan keandalan 95% [20,21,22,23,24,25].
Kelarutan asam oleanolat dalam pelarut biokompatibel, khususnya surfaktan dan polimer, ditunjukkan pada Tabel 1. Asam oleanolat cenderung larut dalam minyak hidrofobik dengan keseimbangan hidrofilik-lipofilik rendah (HLB). Capryol® 90 memiliki nilai HLB yang sedikit lebih tinggi dibandingkan dengan minyak umum [26]. Namun, asam oleanolat menunjukkan kelarutan yang relatif tinggi dalam Capryol® 90. Selain itu, Capryol® 90 dapat dengan mudah distabilkan sebagai inti dalam misel [27]. Setelah memilih Capryol® 90, beberapa jenis surfaktan atau poloxamers disaring untuk bagian cangkang misel asam oleanolat [27,28,29,30]. Komposisi misel asam oleanolat yang ditunjukkan pada Tabel 2 adalah yang transparan segera setelah diencerkan dengan air suling. Namun, beberapa komposisi tidak stabil dan mengalami pengendapan, pemisahan fase, atau gelasi dalam waktu 24 jam. Gambar perwakilan dari endapan, fase terpisah, cairan transparan, dan keadaan gel ditunjukkan pada Gambar. 2. Keadaan akhir dari setiap formula dirangkum dalam Tabel 3. Komposisi G dan H tetap transparan bahkan setelah 24 jam. Meskipun komposisi saya tetap jelas, itu adalah gel daripada cairan. Komposisi A hingga D menjadi buram dengan presipitasi setelah 24 jam. Berdasarkan hasil ini, komposisi G dan H dipilih untuk pengembangan lebih lanjut.
Gambar representatif dari a curah hujan, b pemisahan fase, c cairan transparan, dan d gelasi misel asam oleanolat
Struktur misel polimer asam oleanolat diselidiki dengan uji noda. Gambar 3 menunjukkan gambar campuran Capryol® 90 dan air suling, Capryol® 90, air suling, dan misel polimer komposisi G (PMO-G) dan komposisi H (PMO-H), setelah menambahkan metilen biru ke solusinya. Pemisahan fase bening terjadi untuk campuran Capryol® 90 dan air suling. Pengendapan biru metilen diamati dalam kasus Capryol® 90. Air suling berubah menjadi biru tua setelah penambahan biru metilen. PMO-G dan PMO-H juga berubah menjadi biru yang menunjukkan bahwa misel polimer terdiri dari inti dalam fase minyak dan kulit luar fase air. Dengan kata lain, polimer amfifilik, poloxamer 407 dalam komposisi G dan H, berfungsi sebagai kulit terluar dan membantu membentuk misel polimer asam oleanolat dengan mengenkapsulasi inti dalam Capryol® 90 yang mengandung asam oleanolat [31].
Uji pewarnaan menggunakan metilen biru:(a ) campuran Capryol® 90 dan air suling, (b ) Capryol® 90, (c ) air suling, (d ) PMO-G, dan (e ) PMO-H
Ukuran partikel, distribusi ukuran, dan bentuk dapat menjadi indikator yang baik untuk memprediksi stabilitas fisik formulasi misel. Ukuran partikel rata-rata PMO-G adalah 80,4 nm, dan PMO-H adalah 57 nm (Gbr. 4). Histogram PMO-A, G, dan H ditunjukkan pada Gambar. 5 untuk membandingkan distribusi ukuran yang dipengaruhi oleh keadaan fasa. Seperti yang ditunjukkan pada Tabel 3, PMO-A buram karena presipitasi, dan PMO-G dan H transparan. Ukuran partikel PMO-A lebih dari 100 nm, dan PMO-A menunjukkan distribusi ukuran yang lebih luas daripada PMO-G dan H (Gbr. 5). PMO-H menunjukkan distribusi ukuran partikel yang lebih sempit daripada PMO-G dan menunjukkan fluiditas yang sesuai untuk produk kosmetik.
Ukuran partikel rata-rata PMO-G dan PMO-H dari Tabel 2:80,4 ± 11.1 nm (PMO-G) dan 57 ± 5.24 nm (PMO-H)
Histogram analisis partikel dari tiga sampel PMO yang berbeda. a PMO-A, 121,28 nm; b PMO-G, 80.4 nm; dan (c ) PMO-H, 57 nm
Efisiensi enkapsulasi untuk PMO-G dan PMO-H adalah 99 hingga 100%, menunjukkan bahwa hampir 100% asam oleanolat dienkapsulasi di inti dalam PMO (Gbr. 6).
Efikasi enkapsulasi PMO-G dan PMO-H menunjukkan efisiensi enkapsulasi obat hampir 100%:98,26 ± 0,17% (PMO-G) dan 99,18 ± 1,06% (PMO-H)
Bentuk PMO-G dan PMO-H diselidiki dengan pemindaian cryocroscopy elektron (Cryo-SEM). Cryo-SEM menunjukkan bahwa baik PMO-G dan PMO-H adalah misel polimer berbentuk bola. Namun, misel polimer PMO-H lebih konsisten dalam ukuran dan bentuk daripada misel polimer PMO-G (Gbr. 7).
Memindai gambar cryomicroscopic elektron dari a PMO-G dan b PMO-H
Jumlah total asam oleanolic yang tersisa di kulit, dan jumlah total asam oleanolic yang meresap melalui kulit sebagai fungsi waktu diukur dengan menggunakan kulit tikus betina tidak berbulu berusia 6 minggu. Empat formulasi yang berbeda, PMO-G, PMO-H, campuran asam oleanolat dan Tween 80 terdispersi dalam air suling (OTw), dan campuran asam oleanolat dan propilen glikol terdispersi dalam air suling (OPG) dibandingkan dalam hal kulit efisiensi permeasi asam oleanolat. Jumlah total asam oleanolic yang meresap melalui kulit setelah 24 jam adalah 29,49 ± 4,00% untuk PMO-H, 21,39 ± 5,91% untuk PMO-G, 13,66 ± 0,81% untuk OTw, dan 5,90 ± 2,47% untuk OPG. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar. 7, deteksi pertama asam oleanolat dalam kasus PMO-G dan PMO-H dimungkinkan pada 8 h, sedangkan deteksi pertama asam oleanolic dalam OTw dimungkinkan pada 10 h, dan OPG pada 20 H. Proporsi asam oleanolic yang tertinggal di kulit adalah 56,22 ± 13,50% untuk PMO-H, 36,74 ± 0,72% untuk PMO-G, 27,44 ± 7,02% untuk OTw, dan 26,28 ± 5,42% untuk OPG. PMO-H menunjukkan jumlah terbesar dari kedua asam oleanolic yang meresap melalui kulit dan asam oleanolic yang tersisa di kulit (Gbr. 8). Hasil ini menunjukkan bahwa PMO dapat meresap lebih cepat dan lebih banyak daripada formulasi yang tidak membentuk misel.
Jumlah total asam oleanolat dalam campuran PMO-G, PMO-H, asam oleanolat, dan Tween 80 yang terdispersi dalam air suling (Otw) dan campuran asam oleanolat dan propilen glikol yang terdispersi dalam air suling (OPG) meresap melalui kulit dan jumlah oleanolat asam dalam setiap formulasi sebagai fungsi waktu. Jumlah asam oleanolat yang tersisa di kulit setelah 24 jam:36,74 ± 0,72% (PMO-G), 56,22 ± 13,50% (PMO-H), 27,44 ± 7,02% (Otw), dan 26,28 ± 5,42% (OPG). Jumlah asam oleanolic yang meresap setelah 24 h:21,39 ± 5,91% (PMO-G), 29,49 ± 4,00% (PMO-H), 13,66 ± 0,81% (Otw), dan 5,90 ± 2,67% (OPG)
Berdasarkan karakterisasi dan studi permeasi in vitro, PMO-H akhirnya dipilih untuk preparasi ampul. Sebelum persiapan ampul, stabilitas ONM-H dievaluasi. Untuk studi stabilitas, PMO-H disimpan dalam vial di bawah kondisi studi stabilitas yang dipercepat pada 40 °C/75% RH selama 3 bulan. Pengendapan, pemisahan fase, perubahan warna, dan transparansi kemudian dievaluasi secara visual. Proporsi asam oleanolat kemudian diukur menggunakan HPLC, dan perubahan ukuran partikel juga diperiksa. Stabilitas diperiksa dari waktu ke waktu. PMO-H tetap transparan tanpa pengendapan atau pemisahan fase, dan warnanya tidak berubah selama 3 bulan di bawah kondisi stabilitas yang dipercepat. Proporsi asam oleanolat yang diukur dengan HPLC dan ukuran partikel berubah dari waktu ke waktu ditunjukkan pada Gambar. 9. Proporsi asam oleanolat tetap lebih dari 98%, dan ukuran partikel 49,6 ± 5 nm tetap hampir konstan selama 3 bulan stabilitas masa belajar. Hasil ini menunjukkan bahwa PMO-H stabil secara fisik dan kimia selama 3 bulan dalam kondisi stabilitas yang dipercepat.
Perubahan isi dan ukuran partikel PMO-H selama 3 bulan uji stabilitas dalam kondisi percepatan pada 40 °C/75% RH. Proporsi asam oleanolic dalam PMO-H:100 ± 1,6% (0 bulan), 99,9 ± 0,2% (1 bulan), 99,5 ± 0,2% (2 bulan), dan 99,3 ± 0,2% (3 bulan). Ukuran partikel PMO-H:55,3 ± 6,5 nm (0 bulan), 54,6 ± 7 nm (1 bulan), 51,0 ± 5,56 nm (2 bulan), dan 49,6 ± 5 nm (3 bulan)
Sebelum uji klinis, uji iritasi pada manusia dilakukan pada 25 sukarelawan wanita dan pria sehat berusia 22~56 tahun. Produk uji ditambal pada lengan atas subjek selama 24 jam, dan indeks iritasi kulit diukur 30 menit, 24 jam, dan 48 jam setelah pelepasan tambalan. Iritasi tidak diamati dengan formula ampul kosmetik yang mengandung PMO-H pada 1 jam atau 48 jam setelah pelepasan tambalan.
Uji klinis dilakukan pada 23 subjek wanita, berusia 30~65 tahun dengan kerutan di sekitar mata; tidak termasuk 3 putus sekolah, 20 subjek menyelesaikan percobaan dengan secara terpisah menerapkan kedua produk tes, ampul PMO-H, dan kontrol ke kiri atau kanan sisi wajah mereka selama 8 minggu. Perubahan kulit dievaluasi berdasarkan lima parameter—kekasaran rata-rata (R3) sebagai titik akhir primer, dan empat parameter tambahan sebagai titik akhir sekunder, yaitu kekasaran kulit (R1), kekasaran maksimum (R2), kedalaman kehalusan (R4), dan kekasaran rata-rata aritmatika (R5). Skor evaluasi visual menambahkan titik akhir sekunder lebih lanjut. Hasil dirangkum dalam Tabel 4.
Titik akhir primer R3 telah menurun sebesar 0,673% setelah 4 minggu penggunaan produk uji dan secara statistik signifikan sebesar 7,835% setelah 8 minggu penggunaan (p =0,006). Dengan aplikasi kontrol, R3 meningkat sebesar 5,127% setelah 4 minggu penggunaan dan secara statistik signifikan sebesar 9,971% setelah 8 minggu penggunaan (p =0,010). The difference in R3 value between the areas treated by the test product and those treated by the control was statistically significant after 8 weeks of use (p =0.000) but not statistically significant after 4 weeks of use, perhaps due to inter-subject variation (Fig. 10).
Changes in primary endpoint value, R3, before, after 4 weeks use, and after 8 weeks use of an ampoule containing polymeric micelles of oleanolic acid and the control during clinical trial. R3 value of test product use:0.094 ± 0.023 before use, 0.093 ± 0.023 after 4 weeks use, 0.086 ± 0.020 after 8 weeks use. R3 value of control product:0.087 ± 0.023 before use, 0.091 ± 0.025 after 4 weeks use, 0.095 ± 0.024 after 8 weeks use (A.U. for arbitrary unit). * 1 The wrinkle analysis of R3 value decreased statistically significantly. * 2 The wrinkle analysis of R3 value increased statistically significantly
The analysis of the secondary endpoint R1 showed that the value had decreased by 4.629% after 4 weeks of test product use and statistically significantly by 9.973% after 8 weeks of use (p =0.017). With control application, R1 had increased by 8.037% after 4 weeks of use and 4.799% after 8 weeks of use. The difference in R1 values between the areas using the test product and the control was not statistically significant after 4 weeks of use but was after 8 weeks of use (p =0.024). The secondary endpoint R2 had decreased by 1.048% after 4 weeks of test product use and 5.803% after 8 weeks. With control application, it had increased by 7.261% after 4 weeks and 9.536% after 8 weeks. The difference in R2 value between the areas treated by the test product and those treated by the control was statistically significant after 8 weeks of use (p =0.016) but not after 4 weeks of use. The secondary endpoint R4 had significantly decreased by 8.594% (p =0.039) after 4 weeks of test product use and by 9.747% after 8 weeks of use. With the control, R4 had increased by 10.764% after 4 weeks of use and 3.491% after 8 weeks of use. Interestingly, the difference in R4 value between the areas using the test product and the control was statistically significant after 4 weeks of use (p =0.008) but not after 8 weeks. The secondary endpoint R5 had decreased by 6.333% after 4 weeks of test product use and 8.556% after 8 weeks of use. The difference in R5 value between the areas of using the test product and the control was not statistically significant following 4 weeks or even 8 weeks of use.
The analysis of the further secondary endpoint, the visual evaluation of wrinkles, showed that the visual evaluation score had decreased by 2.917% after 4 weeks of test product use and statistically significantly decreased by 8.333% after 8 weeks of use (p =0.034). With application of the control, the visual evaluation score had increased by 1.667% after 4 weeks and 4.167% after 8 weeks. The difference of the visual evaluation score between the areas treated by the test product and by the control was statistically significant after 8 weeks of use (p =0.046) but not after 4.
In summary, the analysis of the wrinkled area around the eyes showed that the difference in the primary endpoint value R3 between the areas treated by the test product and by the control was statistically significant after 8 weeks of use. In terms of the secondary endpoints, all values had decreased after test product use and increased after control use. The difference in R4 values between the areas treated by the test product and those treated by the control was statistically significant after 4 weeks of use, but the difference of the R1 and R2 values were statistically significant only after 8 weeks of use (Fig. 11). The visual evaluation score by professionals showed that all the average visual evaluation scores for wrinkles had decreased after 4 weeks and 8 weeks of test product treatment compared to the control (Table 5). The difference in the visual evaluation score between the areas treated by the test product and by the control was statistically significant after 8 weeks of use (Fig. 12). Overall, according to all endpoints, the cosmetics formula containing PMO-H as a primary ingredient was found to help improve wrinkles after 8 weeks of use (Fig. 13).
Results of secondary endpoint R1, R2, R4, and R5 for skin wrinkle measurement—before use, after 4 weeks use, and after 8 weeks use of the test product and the control. Please refer to Table 4 for the exact values (A.U. for arbitrary unit)
Results of visual evaluation of skin—before use, after 4 weeks use, and after 8 weeks use of the test product and the control. Test product:3.050 ± 0.887 before use, 2.95 ± 0.999 after 4 weeks use, and 2.75 ± 0.851 after 8 weeks. Control product:2.900 ± 0.887 before use, 2.95 ± 0.945 after 4 weeks use, and 3.000 ± 0.918 after 8 weeks use. * 1 The visual evaluation grade of wrinkles by professionals decreased significantly. * 2 The visual evaluation grade of wrinkles by professionals increased significantly
Pictures of the tested areas
Surfactants are commonly used excipients in cosmetic products to improve solubility of poorly soluble materials. One caveat would be the amount included in the product. Surfactants should be added in sufficient amount to dissolve poorly soluble materials without precipitation. Only a minimal amount should be added for safety reasons. Micelle formulation could be the solution to this problem. Polymeric micelles of oleanolic acid developed in this study improve the solubility of oleanolic acid with a minimum amount of surfactants and enhance the permeation of oleanolic acid through the skin. Stable polymeric micelles of oleanolic acid were developed using Capryol 90 and poloxamer. The polymeric micelles of oleanolic acid developed in this study were stable, that is, they did not show any precipitation, phase separation, or degradation at 40 °C after 3 months. The clinical trial showed that, as a main active ingredient, the oleanolic acid in the polymeric micelle formulation is effective for alleviating human wrinkles. Based on these findings, it can be concluded that oleanolic acid, which is poorly soluble in water and therefore, unusable in a native form as a principal ingredient for alleviating skin wrinkles, can be formulated into applicable polymeric micelles. Furthermore, it is expected that the polymeric micelles of oleanolic acid developed in this study will prove very useful for alleviating human wrinkles and will prove widely applicable to cosmetic applications.
Not applicable
Polymeric micelles of oleanolic acid
Polietilen glikol
Highly purified diethylene glycol monoethyl ether
PEG-8 Caprylic/Capric Glycerides
Propylene glycol monolaurate (type I, monoesters>45%)
Caprylic/Capric Triglyceride
Propylene glycol monocaprylate (type II, monoesters>90%)
Propylene glycol monocaprylate (type I, monoesters>55%)
Ethylenediaminetetraacetic Acid
Electrophoretic light scattering
bahan nano
Abstrak Array yang dipesan secara berkala dari kawat nano Si (Si NWs) yang disejajarkan secara vertikal berhasil dibuat dengan diameter dan panjang yang dapat dikontrol. Sifat fotokonduktif mereka diselidiki oleh mikroskop kekuatan atom fotokonduktif (PCAFM) pada kawat nano individu. Hasil peneliti
Abstrak Terjemahan klinis dari obat nano berbasis poli (asam laktat-co-glikolat) (PLGA) terbatas, sebagian karena efisiensi pengiriman yang buruk akibat fagositosis non-spesifik oleh fagosit. Memahami interaksi nanopartikel antara sel kanker dan sel kekebalan sebagian besar masih sulit dipahami. Da
Proses Aglomerasi Bijih Besi dan Perkembangan Historisnya Ada empat jenis proses aglomerasi yang telah dikembangkan (Gambar 1). Mereka adalah (i) briket, (ii) nodulizing, (iii) sintering, dan (iv) pelletizing. Gambar 1 Proses aglomerasi Briket adalah proses yang paling sederhana dan paling awa
Pendahuluan: Baterai EV atau baterai kendaraan listrik adalah sistem baterai yang dibuat untuk kendaraan listrik. Kendaraan listrik bukanlah sesuatu yang baru; kita sudah membangun motor listrik dan infrastruktur yang sesuai lalu apa yang kurang? Kenapa mereka tidak mengambil alih dunia? Alasannya
