Biosensor Kortisol Elektrokimia Ludah Berbasis Nanoflakes Tin Disulfide
Abstrak
Kortisol, suatu hormon steroid, disekresikan oleh sistem hipotalamus-hipofisis-adrenal. Ini adalah biomarker stres psikologis yang terkenal dan karenanya dikenal sebagai "hormon stres." Jika overekspresi kortisol berkepanjangan dan berulang, akhirnya terjadi disfungsi regulasi kortisol. Oleh karena itu, diperlukan pemeriksaan di tempat perawatan yang cepat untuk mendeteksi kortisol. Analisis elektrokimia kortisol saliva adalah metode non-invasif yang berpotensi berguna dalam memungkinkan pengukuran cepat kadar kortisol. Dalam penelitian ini, film multilayer yang mengandung nanoflakes timah disulfida dua dimensi, antibodi kortisol (C-Mab ), dan albumin serum sapi (BSA) disiapkan pada elektroda karbon kaca (GCE) sebagai BSA/C-Mab /SnS2 /GCE, dan dikarakterisasi menggunakan spektroskopi impedansi elektrokimia dan voltametri siklik. Respon elektrokimia dari biosensor sebagai fungsi konsentrasi kortisol ditentukan menggunakan voltametri siklik dan voltametri pulsa diferensial. Biosensor kortisol ini menunjukkan rentang deteksi dari 100 pM hingga 100 M, batas deteksi 100 pM, dan sensitivitas 0,0103 mA/Mcm
2
(R
2
=0,9979). Akhirnya, konsentrasi kortisol dalam sampel air liur asli yang diperoleh dengan menggunakan sistem elektrokimia yang dikembangkan berkorelasi baik dengan hasil yang diperoleh dengan menggunakan uji imunosorben terkait-enzim. Biosensor ini berhasil disiapkan dan digunakan untuk deteksi elektrokimia kortisol saliva pada rentang fisiologis, berdasarkan spesifisitas interaksi antibodi-antigen.
Pengantar
Kortisol, suatu hormon steroid, disekresikan oleh sistem hipotalamus-hipofisis-adrenal (HPA). Ini adalah biomarker stres psikologis yang terkenal dan karenanya disebut "hormon stres" [1, 2]. Tingkat kortisol mengikuti ritme sirkadian selama siklus 24 jam; tingkat tertinggi diamati pagi hari, dan tingkat semakin berkurang pada malam hari [3,4,5,6]. Kadar kortisol yang berlebihan dapat menyebabkan penyakit Cushing, dengan gejala obesitas sentral, striae ungu, dan kelemahan otot proksimal. Namun, penurunan kadar kortisol dapat menyebabkan penyakit Addison, dengan kelelahan kronis, malaise, anoreksia, hipotensi postural, dan hipoglikemia [7,8,9]. Oleh karena itu, menjaga keseimbangan kortisol yang tepat sangat penting untuk kesehatan manusia.
Minat yang berkembang dalam pengukuran kortisol sebagai prekursor untuk peristiwa yang relevan secara medis dan psikologis telah berkembang, di antaranya penderitaan terbaru adalah gangguan stres pasca-trauma (PTSD). Pentingnya fungsi sumbu HPA yang menyimpang di PTSD tidak dapat disangkal; karenanya, metode penilaian tradisional masih mampu memberikan banyak bukti dan informasi [10,11,12,13,14]. Baru-baru ini, banyak penelitian telah melaporkan pentingnya deteksi kortisol dan telah mengidentifikasi korelasi dengan penyakit yang berbeda [15,16,17,18]. Berbagai penelitian telah mengkonfirmasi bahwa kortisol terkait dengan gangguan spektrum autisme [19], depresi [20], ide bunuh diri [21], kesulitan masa kanak-kanak, dan gangguan eksternalisasi [22].
Meskipun mengidentifikasi kadar kortisol merupakan alat diagnostik yang penting, teknik deteksi kortisol laboratorium rutin seperti kromatografi [23, 24], radioimmunoassay [25], electro-chemiluminescent immunoassay [26,27,28], enzyme-linked immunosorbent assay [28,29] ], resonansi plasmon permukaan [1, 30, 31], dan microbalance kristal kuarsa [32] melibatkan waktu analisis yang ekstensif, mahal, dan tidak dapat diimplementasikan dalam pengaturan point-of-care (POC) [33]. Oleh karena itu, saat ini diperlukan penentuan kadar kortisol yang sensitif, efisien, dan real-time.
Dalam beberapa tahun terakhir, metode immunoassay elektrokimia, yang didirikan pada pengenalan molekul spesifik antara antigen dan antibodi, telah muncul sebagai teknologi yang menjanjikan karena karakteristik yang menonjol, seperti melibatkan perangkat sederhana, analisis cepat, biaya rendah, pengujian POC bebas label, sensitivitas tinggi, dan ambang deteksi rendah untuk kortisol dalam cairan bio [34, 35]. Perubahan potensial listrik dianggap berasal dari variasi konsentrasi reaksi redoks elektrokimia pada elektroda. Kortisol yang disekresikan akhirnya memasuki sistem peredaran darah dan dapat ditemukan di berbagai cairan biologis seperti cairan interstisial [36], darah [37], urin [38], keringat [39], dan air liur [40]. Keuntungan deteksi elektrokimia kortisol saliva, yang merupakan metode non-invasif, dengan pengumpulan, penanganan, dan penyimpanan sampel yang mudah, telah meningkatkan potensinya untuk aplikasi dalam sensor POC untuk pengukuran waktu nyata [41].
Biosensor yang ideal harus memiliki batas deteksi yang rendah, selektivitas yang cepat, dan sensitivitas yang tinggi. Untuk membuat imunosensor, matriks imobilisasi yang dipilih harus memiliki fungsionalitas permukaan yang tinggi, pemuatan biomolekul yang tinggi, dan resistensi yang rendah terhadap transpor elektron, dengan laju transfer elektron yang tinggi [42]. Namun, nanomaterial logam sulfida jarang disarankan untuk imobilisasi protein untuk biosensing elektrokimia. Oleh karena itu, di sini, timah disulfida dipilih sebagai matriks immobilisasi potensial untuk pengembangan imunosensor untuk mendeteksi kortisol yang ada dalam air liur.
Bahan nano dua dimensi (2D) telah menarik minat penelitian yang melimpah dalam dekade terakhir. Ada berbagai jenis bahan 2D mulai dari semikonduktor hingga logam dan dari anorganik hingga organik [43,44,45,46] dan komposit terkait [47,48,49,50]. Penemuan, pembuatan, dan investigasi pada material nano 2D adalah aliran yang berlaku di berbagai bidang. Nano 2D timah disulfida (SnS2 ), semikonduktor tipe-n dengan celah pita 2,18–2,44 eV [51, 52], terdiri dari atom Sn yang diapit di antara dua lapisan atom sulfur (S) yang tersusun secara heksagonal dan tersusun rapat, dengan lapisan S yang berdekatan dihubungkan oleh van der lemah Pasukan Waals [53]. Karena sifat kelistrikannya yang menarik, mobilitas pembawa yang tinggi, stabilitas kimia yang baik, biaya rendah, dan sifat optik [54], SnS2 telah berkembang menjadi bahan yang menjanjikan untuk berbagai aplikasi dalam sel surya dan perangkat optoelektronik [55, 56], sebagai elektroda dalam baterai lithium-ion [57, 58], sensor gas, dan monitor glukosa [59, 60]. Pemilihan bahan elektroda merupakan faktor kunci penting untuk meningkatkan kinerja dengan menyediakan area reaksi yang besar dan lingkungan mikro yang menguntungkan untuk memfasilitasi transfer elektron antara enzim dan permukaan elektroda.
Dalam karya ini, biosensor dibuat menggunakan SnS2 sebagai matriks immobilisasi untuk mendeteksi kortisol. Hasil studi differential pulse voltametry (DPV) terkait penginderaan elektrokimia menunjukkan sensitivitas tinggi sebesar 0,0103 mA/Mcm
2
dan konsentrasi deteksi terendah 100 pM.
Bahan dan Metode
Materi
Hidrokortison (kortisol), antibodi kortisol anti-kelinci (anti-kortisol, C-Mab ), kalium hexacyanoferrate (II), kalium hexacyanoferrate (III), -estradiol, testosteron, progesteron, dan kortikosteron dibeli dari Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). Albumin serum sapi (BSA) diperoleh dari PanReac. Timah (IV) klorida pentahidrat (SnCl4.
5H2 O) dan tioasetamida (C2 H5 NS) dipasok oleh Showa (Jepang) dan Alfa Aesar (Inggris). Fosfat buffered saline (PBS) disiapkan dengan NaCl, KCl, Na2 HPO4 , dan KH2 PO4 dibeli dari Sigma-Aldrich. Alumina yang dipoles mikro bersumber dari Buehler (Inggris). Semua bahan kimia lainnya adalah kelas analitis dan digunakan tanpa pemurnian lebih lanjut. Kortisol Saliva ELISA kit (Cat # SA E-6000) dibeli dari LDN (Jerman).
Sintesis Timah Disulfida
Serbuk SnCl4 ·5H2 O dan C2 H5 NS dicampur dalam 70 mL air deionisasi dan pH diatur menjadi 7,4. Reaktor autoklaf hidrotermal yang berisi reaktan dipanaskan dari suhu kamar hingga 200
°
C dalam 1 jam, dan dipertahankan pada 200
°
C selama 11 jam. Kemudian, SnS yang dihasilkan2 bubuk dicuci dengan air deionisasi dan etanol pada 6000 rpm selama 15 menit, dan akhirnya dikeringkan di udara pada 80
°
C. Metode hidrotermal ini berhasil diterapkan untuk sintesis SnS2 .
Karakterisasi Material
Difraksi sinar-X (XRD, PANalytical, Belanda) digunakan untuk menyelidiki fase kristal SnS heksagonal 2D2 serpih. Mikroskop elektron pemindaian emisi medan multi-fungsional (FE-SEM, Zeiss, Jerman) digunakan untuk mencitrakan morfologi permukaan bahan. Mikroskop elektron transmisi senjata emisi lapangan (FEG-TEM, Tecnai, USA) digunakan untuk membedakan struktur mikro SnS2 , dan difraksi area terpilih (SAED, Tecnai) digunakan untuk mendapatkan pola kristal.
Fabrikasi BSA/C-Mab /SnS2 /GCE Biosensor
Elektroda karbon kaca (GCEs) pertama-tama dipoles dengan bubur alumina, dan kemudian diteteskan campuran 5 M SnS2 diendapkan pada permukaan GCE yang telah diolah sebelumnya. Solusi antibodi anti-kortisol (1 mg/mL) dan BSA (1%) disiapkan dalam PBS. SnS2 /GCE kemudian didekorasi dengan larutan antibodi dan BSA secara berurutan. BSA/C-Mab . yang dibuat /SnS2 /GCE biosensor disimpan dalam lemari pendingin pada 4
°
C saat tidak digunakan. Konsep penelitian dan pengaturan sistem deteksi diilustrasikan pada Gambar 1.
Konsep penelitian dan penyiapan sistem deteksi
Analisis Elektrokimia
BSA/C-Mab /SnS2 / GCE dikarakterisasi menggunakan spektroskopi impedansi elektrokimia (EIS) dan voltametri siklik (CV) untuk membandingkan perilaku elektro-aktifnya. Studi respon elektrokimia sebagai fungsi konsentrasi kortisol dilakukan dengan menggunakan CV dan voltametri pulsa diferensial (DPV). Semua percobaan dilakukan menggunakan sistem tiga elektroda dengan GCE sebagai elektroda kerja, kawat Pt sebagai elektroda bantu, dan elektroda kalomel jenuh sebagai elektroda referensi dalam 10 mM PBS (pH 7,4) yang mengandung 5 mM Fe(CN). )6
3-/4-
. Pengukuran elektrokimia dilakukan pada stasiun kerja elektrokimia seri Model CHI6114E (CH Instruments, USA). Pengukuran CV dan DPV dilakukan antara 0,4 V dan 1,0 V pada kecepatan pemindaian 10 mV/s, kecuali ditentukan lain.
Pengumpulan Sampel Air Liur dan Penginderaan Elektrokimia
Sampel air liur (2 mL) dikumpulkan dari dua subjek sukarela yang sehat sekitar tengah hari untuk memvalidasi BSA/C-Mab yang dikembangkan /SnS2 /GCE. Sampel air liur diperoleh tanpa penyaringan apa pun dan awalnya disimpan pada suhu -20 ° C untuk mempertahankan karakteristik biologis. Sebelum penginderaan, sampel air liur dicairkan ke suhu kamar dan disentrifugasi pada 3500 rpm selama 15 menit untuk mengumpulkan supernatan untuk pengukuran. Saliva yang dipisahkan disimpan pada suhu -20 °C. BSA/C-Mab /SnS2 / GCE digunakan untuk penginderaan elektrokimia konsentrasi kortisol dalam sampel air liur. Deteksi kortisol menggunakan analisis elektrokimia dengan BSA/C-Mab /SnS2 /GCE dibandingkan dengan kit kortisol ELISA yang tersedia secara komersial yang disebutkan di atas.
Studi Interferensi
Efek penghambatan agen pembaur potensial, seperti hormon steroid lainnya, pada BSA/C-Mab /SnS2 Spesifisitas /GCE diselidiki dengan menempatkan biosensor dalam larutan berbeda berikut:100 nM -estradiol, 100 nM testosteron, 100 nM progesteron, dan 100 nM kortikosteron, selama 10 menit dan kemudian dipindai oleh CV. Kecepatan pemindaian adalah 10 mV/s dan rentang pemindaian dari 0,4 V hingga 0,6 V.
Deteksi Kortisol Saliva dengan ELISA
ELISA dilakukan pada sampel air liur sesuai dengan protokol pabrikan. Untuk menetapkan kurva kalibrasi untuk pengukuran kortisol, pengujian dilakukan di pelat titer 96-sumur yang berisi enam konsentrasi kortisol standar yang diketahui (0,0, 0,1, 0,4, 1,7, 7,0, dan 30 ng/mL) untuk menentukan absorbansi masing-masing sumur. pada 450nm. Kurva kalibrasi dilengkapi dengan garis tren untuk mendapatkan persamaan untuk perhitungan sampel yang tidak diketahui.
Hasil dan Diskusi
Analisis Material SnS2
Seperti yang terlihat dari pola XRD pada Gambar. 2a, produk hasil sintesis hanya menampilkan puncak XRD yang sesuai dengan fase heksagonal SnS2 (Kartu JCPDS no. 89-2358). Gambar 2b, c mengilustrasikan gambar FE-SEM dari SnS yang disintesis2 memiliki morfologi seperti serpihan yang seragam dengan ukuran sekitar 300 nm. Gambar 2d–f menunjukkan gambar FEG-TEM dan SAED dari SnS2 , di mana jarak pinggiran kisi 0,167 nm dan 0,316 nm diidentifikasi untuk SnS heksagonal2 sebagai struktur kristal tunggal. Penumpukan nanoflakes kurang dari 10 lapisan dengan ketebalan total kurang dari 10 nm.
a Pola XRD dari SnS2 . Gambar FE-SEM dari SnS2 nanoflakes diambil pada perbesaran (b ) × 250.000 dan (c ) × 100.000. d Gambar FEG-TEM dari SnS2 nanoflake. e FEG-TEM penampang SnS2 nanoflakes dan gambar FEG-TEM yang diperbesar. f Gambar SAED dari SnS2 nanoflake
Respons Elektrokimia Elektroda
Arus oksidasi dapat sangat meningkat dengan penambahan timah disulfida. Seperti ditunjukkan pada Gambar. 3a, b, besarnya arus oksidasi berkurang dari SnS2 /GCE ke C-Mab /SnS2 /GCE, diikuti oleh BSA/C-Mab /SnS2 /GCE, karena nilai resistansi transfer muatan meningkat. Oleh karena itu, hasil menunjukkan bahwa sifat sensor dimodifikasi pada elektroda. Awalnya, BSA/C-Mab /SnS2 /GCE dipelajari dengan memvariasikan laju pemindaian dari 10 mV/s hingga 100 mV/s, seperti yang ditunjukkan pada Gambar 3c. Perubahan respons arus dengan laju pemindaian, seperti yang diplot pada Gambar. 3d, menunjukkan bahwa arus oksidasi meningkat secara linier dengan laju pemindaian, dan mengikuti hubungan:I =0,5156 –0,0319 (R
2
=0,9985 dalam oksidasi, dan I =0,6758υ–0,0288 (R
2
=0,9997) dalam pengurangan. Namun, mendekati linieritas untuk kenaikan arus puncak dengan meningkatnya laju pemindaian dengan puncak redoks yang terdefinisi dengan baik menunjukkan proses yang dikendalikan permukaan, dengan transfer elektron yang stabil.
a Studi respon CV elektroda GCE (kurva a), SnS2 /GCE elektroda (kurva b), C-Mab /SnS2 /GCE elektroda (kurva c), BSA/C-Mab /SnS2 /GCE elektroda (kurva d). b Studi tanggapan EIS dari GCE, SnS2 /GCE, C-Mab /SnS2 /GCE, dan BSA/C-Mab /SnS2 / elektroda GCE. Inset:rangkaian ekivalen yang sesuai. c Peningkatan besarnya arus respon oksidasi BSA/C-Mab /SnS2 /GCE elektroda dengan peningkatan kecepatan pemindaian dari 10 mV/s menjadi 100 mV/s. d Magnitudo saat ini meningkat dengan meningkatnya scan rate. e Studi CV BSA/C-Mab /SnS2 /GCE elektroda sebagai fungsi konsentrasi kortisol bervariasi dari 100 pM sampai 100 M. f Kurva linieritas untuk respon saat ini dengan konsentrasi kortisol yang berbeda. g Studi DPV BSA/C-Mab /SnS2 /GCE elektroda sebagai fungsi konsentrasi kortisol bervariasi dari 100 pM sampai 100 M. h Kurva linieritas untuk respons saat ini dengan konsentrasi kortisol yang berbeda
Arus menurun dengan meningkatnya konsentrasi kortisol selama kisaran 100 pM sampai 100 pM. Perbedaan arus secara langsung berkorelasi dengan konsentrasi kortisol yang dirasakan. Nilai saat ini dan puncak oksidasi yang dipisahkan dengan baik diperoleh untuk BSA/C-Mab /SnS2 /GCE elektroda, seperti yang ditunjukkan pada Gambar. 3e, f. Perubahan arus dengan log konsentrasi hampir linier. Jelas bahwa penurunan koefisien regresi linier lebih baik untuk CV. Oleh karena itu, dilakukan pengukuran lebih lanjut dengan DPV yang lebih spesifik dan akurat. Hasil studi DPV tersebut menunjukkan bahwa besarnya respon saat ini menurun dengan penambahan kortisol, seperti yang diilustrasikan pada Gambar. 3g. Kurva kalibrasi yang disajikan pada Gambar. 3h memplot besarnya respons saat ini dan logaritma konsentrasi kortisol, dan ternyata bergantung linier dan mengikuti persamaan:y =0.0103x + 0,0443; R
2
=0,9979. Sensor ini menunjukkan rentang deteksi antara 100 pM hingga 100 M, dengan batas deteksi 100 pM dan sensitivitas 0,0103 mA/Mcm
2
(R
2
=0,9979).
Studi Stabilitas Penyimpanan
Studi CV juga dilakukan untuk mempelajari masa simpan BSA/C-Mab /SnS2 /GCE dengan interval 1 hari hingga 1 minggu. Untuk membandingkan dua kondisi pengawetan, satu kondisi adalah menyimpan elektroda yang dikeringkan di bawah vakum, sedangkan yang lainnya adalah menyimpan elektroda pada 4 °C. Stabilitas puncak redoks elektroda pada 4 °C dan di bawah vakum ditunjukkan pada Gambar. 4a, c, masing-masing. Jelas bahwa kondisi pengawetan pada 4 ° C lebih baik daripada di bawah vakum. Gambar 4b, d menunjukkan nilai stabilitas elektroda sebesar 82% dengan elektroda yang disimpan dalam kondisi vakum selama 7 hari, sedangkan nilai stabilitas elektroda sebesar 91% dengan elektroda yang disimpan pada suhu 4 °C. Dapat diamati bahwa stabilitas elektroda yang disimpan pada suhu 4 °C lebih tinggi daripada di bawah vakum. Hilangnya aktivitas elektroda mungkin disebabkan oleh degradasi aktivitas antibodi kortisol di bawah vakum. Stabilitas penyimpanan adalah masalah penting untuk sensor enzimatik. Lapisan pelindung dapat diperkenalkan dalam desain elektroda di masa mendatang.
Stabilitas puncak redoks BSA/C-Mab /SnS2 /GCE elektroda dengan kondisi pengawetan yang berbeda (a dan b ) di bawah vakum (c dan d ) pada 4 °C selama 7 hari
Studi Interferensi
Hasil studi CV BSA/C-Mab /SnS2 / GCE untuk mengukur agen pembaur potensial, seperti -estradiol (100 nM), testosteron (100 nM), progesteron (100 nM), dan kortikosteron (100 nM) sehubungan dengan kortisol (10 nM), ditunjukkan pada Gambar. 5a. Dibandingkan dengan perubahan respons sinyal kortisol, efek interferensi kurang dari 5% dari hasil untuk kortisol, menunjukkan bahwa potensi interferensi seperti itu dapat dengan mudah diabaikan.
a Studi interferensi yang melibatkan -estradiol (100 nM), testosteron (100 nM), progesteron (100 nM), dan kortikosteron (100 nM) terhadap kortisol (10 nM). b Perbandingan pengukuran kortisol saliva menggunakan ELISA dan metode elektrokimia
Deteksi Kortisol Saliva Menggunakan Metode ELISA dan Elektrokimia
Pengukuran sampel kortisol saliva dilakukan dengan ELISA dan BSA/C-Mab /SnS2 /GCE elektroda diringkas dalam Tabel 1 dan Gambar. 5b. Konsentrasi kortisol yang ditentukan menggunakan ELISA adalah 1,105 ×10
−8
M dan 3,998 × 10
−9
M. Hasil perhitungan kortisol menggunakan pengukuran elektrokimia adalah 1,046 × 10
−8
M dan 3,911 × 10
−9
M. Korelasi yang baik dicapai dengan dua teknik ini, menunjukkan hasil yang sebanding dengan hanya perbedaan 2-5%. Oleh karena itu, hasil menunjukkan bahwa BSA/C-Mab . ini /SnS2 /GCE dapat digunakan untuk penginderaan kortisol elektrokimia dalam cairan yang relevan secara biologis seperti air liur.
Perbandingan dengan Studi Lain
Hasil penelitian ini dibandingkan dengan penelitian lain yang melibatkan sensor elektrokimia kortisol saliva yang dilaporkan dalam literatur untuk mendapatkan pemahaman yang lebih baik tentang kinerja BSA/C-Mab ini. /SnS2 /GCE. Tabel 2 dan 3 menunjukkan perbandingan hasil yang diperoleh dengan menggunakan elektroda non-emas dalam deteksi kortisol. Ada tiga keuntungan utama dari karya ini. Pertama, biaya bahan jauh lebih rendah daripada perangkat yang disajikan dalam penelitian lain. Kedua, proses persiapannya relatif sederhana dan cepat. Akhirnya, batas deteksi serupa dengan yang dilaporkan dalam literatur lain atau bahkan lebih baik dari yang dilaporkan, sedangkan rentang deteksi target untuk kortisol saliva mudah diperoleh.
Kesimpulan
Metode hidrotermal telah berhasil diterapkan untuk sintesis SnS2 . Properti SnS2 dikarakterisasi dengan XRD, FE-SEM, FEG-TEM, dan SAED. Respon elektrokimia elektroda sebagai fungsi konsentrasi kortisol ditentukan dengan menggunakan CV dan DPV. Sensor kortisol kami menunjukkan rentang deteksi dari 100 pM hingga 100 M, batas deteksi 100 pM, dan sensitivitas 0,0103 mA/Mcm
2
(R
2
=0,9979). Parameter penginderaan yang diperoleh berada dalam rentang fisiologis normal. Dampak gangguan potensial kurang dari 5%, menunjukkan spesifisitas yang baik dari sensor ini. Pengujian stabilitas menunjukkan bahwa aktivitas sensor yang disimpan pada suhu 4 °C lebih baik daripada di bawah vakum. Hasil elektroda ini untuk pengukuran kortisol pada sampel saliva sesuai dengan ELISA. Oleh karena itu, analisis elektrokimia menggunakan BSA/C-Mab . ini /SnS2 Elektroda /GCE dapat menggantikan pendekatan immunoassay yang memakan waktu lebih lama.
Ketersediaan Data dan Materi
Semua data yang dihasilkan atau dianalisis selama penelitian ini disertakan dalam artikel yang dipublikasikan ini.
Singkatan
2D:
Dua dimensi
BSA:
Albumin serum sapi
C-Mab :
Antibodi kortisol
CV:
Voltametri siklik
DPV:
Voltametri pulsa diferensial
EIS:
Spektroskopi impedansi elektrokimia
ELISA:
Uji imunosorben terkait-enzim
FEG-TEM:
Mikroskop elektron transmisi senjata emisi lapangan
