Penyerapan Klorin e6 Fotosensitizer oleh Polystyrene-Diphenyloxazole-Poly(N-Isopropylacrylamide) Hybrid Nanosystem Dipelajari oleh Transfer Energi Eksitasi Elektronik
Abstrak
Polistirena (PS)-difeniloksazol (PPO) nanopartikel dengan rantai poli-N-isopropilakrilamida (PNIPAM) yang terhubung silang diperoleh menghasilkan sistem nano hibrida PS-PPO-PNIPAM (NS). Spektrum fluoresensi klorin e6 ditambahkan ke PS-PPO-PNIPAM hybrid NS mengungkapkan transfer energi eksitasi elektronik (EEET) dari matriks PS dan enkapsulasi PPO ke klorin e6 . Efisiensi EEET meningkat pesat selama 1 jam setelah klorin e6 Selain itu, menunjukkan bahwa penyerapan klorin e6 oleh PNIPAM bagian dari NS hybrid masih berlangsung selama ini. Pemanasan PS-PPO-PNIPAM-klorin e6 NS dari 21 hingga 39 °C menghasilkan peningkatan efisiensi EEET; Hal ini sesuai dengan transisi konformasi PNIPAM yang mengurangi jarak antara donor PS-PPO dan klorin e6 akseptor. Sedangkan klorin e6 hadir dalam larutan terikat oleh PNIPAM; dengan demikian, studi lebih lanjut ke arah ini diperlukan.
Latar Belakang
Kerugian utama dari terapi fotodinamik kanker adalah rendahnya kedalaman penetrasi sinar eksitasi ke dalam jaringan [1]. Dengan demikian, pendekatan terapi radiodinamik untuk pengobatan kanker (di mana sensitizer dapat dieksitasi secara efisien dengan sinar-X yang mampu menembus jauh ke dalam tubuh) diusulkan [2] dan dipelajari secara intensif dalam beberapa tahun terakhir [3,4,5]; salah satu ruang lingkup penelitian adalah pengembangan sensitizer yang menghasilkan oksigen singlet pada eksitasi sinar-X [5,6,7,8]. Proses kunci dalam sensitizer sinar-X tersebut adalah transfer energi eksitasi elektronik (electronic excitation energy transfer/EEET) antara komponen yang menggetarkan dan sensitisasi [2, 6, 9,10,11]. Komponen penting lainnya dari sensitizer sinar-X yang disebutkan adalah cara menjaga bagian-bagian yang berkilau dan peka bersama-sama pada jarak yang optimal untuk EEET; konjugasi kimia [2, 3], tarik-menarik elektrostatik [8, 12], surfaktan [11], atau cangkang polimer [4] dapat disebutkan. Sebelumnya, dalam kerangka merancang sistem nano (NS) untuk sensitisasi oksigen singlet tereksitasi sinar-X, kami mempelajari EEET dalam polistirena (PS)-difeniloksazol (PPO)-klorin e6 NS, di mana fotosensitizer klorin e6 terikat pada nanopartikel PS-PPO (yang dapat digunakan sebagai sintilator [13, 14]) melalui cangkang surfaktan (natrium dodesilsulfat) [15].
Poli(N-isopropilakrilamida) (PNIPAM) termasuk bahan yang responsif terhadap rangsangan yang mengubah sifatnya sebagai respons terhadap stimulus internal atau eksternal [16]. PNIPAM linier diketahui mengalami transisi konformasi pada pemanasan, yaitu, polimer menyusut (karena menjadi hidrofobik dan dengan demikian mengeluarkan molekul air) pada suhu di atas suhu larutan kritis yang lebih rendah (LCST) yang sama dengan 32 °C untuk PNIPAM linier [17] . Penurunan yang cukup besar pada lebar cangkang PNIPAM pada transisi suhu melalui LCST ditunjukkan untuk nanopartikel PS-PNIPAM di [17]. Pada saat yang sama, untuk rantai PNIPAM yang terkonjugasi ke dekstran, suhu transisi konformasi terbukti 2–4 °C lebih tinggi dibandingkan dengan PNIPAM linier dengan berat molekul dan polidispersitas yang serupa karena interaksi sterik antara rantai PNIPAM yang menghambat konformasi. transisi [18].
Dalam karya ini, nanopartikel PS-PPO yang ditutupi oleh cangkang PNIPAM yang terhubung silang (Gbr. 1 dan 2) diperoleh menghasilkan NS hibrida PS-PPO-PNIPAM. Kemungkinan menggunakan PNIPAM cross-linked untuk melampirkan klorin e6 sensitizer untuk sintilator PS-PPO NP dipelajari. Polimer ini memiliki transisi konformasi pada suhu fisiologis (untuk PNIPAM cross-linked, LCST harus lebih tinggi dari 32 °C). Dengan demikian, penyusutan jaringan PNIPAM cross-link setelah pemanasan di bawah eksitasi dapat mengakibatkan penurunan jarak antara donor PS-PPO dan klorin e6 akseptor yang akan meningkatkan efisiensi EEET dan dengan demikian efisiensi penghancuran tumor.
Struktur komponen sistem nano hibrida PS-PPO-PNIPAM dan klorin e6
Gambar TEM dari sistem nano hibrida PS-PPO-PNIPAM yang diperoleh dengan perbesaran bawah (kiri) dan lebih tinggi (kanan)
Eksperimental
Materi
Styrene (ST, Ukraina) dari p.a. kualitas dimurnikan melalui metode standar langsung sebelum polimerisasi. N-Isopropylacrylamide (NIPAM, Sigma-Aldrich Inc.), N,N-methylenebisacrylamide (BIS, Sigma-Aldrich Inc.), kalium persulfat K2 S2 O8 (KPS, Ukraina), natrium fosfat monobasa dehidrasi NaH2 PO4 × 2H2 O (Ukraina), dan surfaktan anionik natrium dodesil sulfat (SDS, Sigma-Aldrich Inc.) memiliki tingkat reagen dan digunakan tanpa pemurnian lebih lanjut. Klorin e6 (Frontier Scientific Inc.) dengan baik hati disediakan oleh T.Y. Ohulchanskyy (Institute for Lasers, Photonics and Biophotonics di State University of New York at Buffalo). Lima puluh milimolar buffer TRIS-HCl (pH 7.2) digunakan sebagai pelarut.
Sintesis dan Karakterisasi Nanosistem
Sistem nano hibrida polistirena-poli(N-isopropilakrilamida), yang didoping dengan PPO (PS-PPO-PNIPAM hybrid NS), disintesis sebagai berikut. Pertama, nanopartikel inti PS-co-PNIPAM yang didoping dengan PPO dibuat dengan polimerisasi mikroemulsi [13, 14, 19, 20]. Secara singkat, 0,2 g NIPAM, 0,2 g natrium dodesilsulfat, dan 0,01 g NaH2 PO4 × H2 O dilarutkan dalam 90 g H2 O. Kemudian, 0,09 g PPO dilarutkan dalam 1,8 g stirena dan campuran yang diperoleh ditambahkan tetes demi tetes selama 30 menit juga. Campuran diaduk pada 700 rpm, dan Ar digelembungkan ke dalam campuran selama 30 menit. Setelah suhu meningkat menjadi 70 °C, 0,01 g K2 S2 O8 dilarutkan dalam 1 ml H2 O disuntikkan untuk memulai polimerisasi. Kedua, lapisan cangkang PNIPAM dibuat setelah 4 jam pemanasan pada 70 °C. Untuk tujuan ini, larutan monomer NIPAM (0,69 g) dan pengikat silang N,N′-metilenbisakrilamida (BIS) (0,06 g) ditambahkan ke dalam reaktor menggunakan jarum suntik. Reaksi dibiarkan berlanjut selama 3 jam pada 70 °C dan tambahan 1 jam pada 90 °C. Campuran didinginkan hingga suhu kamar dan didialisis selama 48 jam menggunakan membran selulosa dengan MWCO 3500 Da.
Gambar mikroskop elektron transisi (TEM) dari sistem nano yang diperoleh disajikan pada Gambar 2. Untuk preparasi sampel, kisi-kisi Cu 400 mesh dengan film karbon biasa dibuat hidrofilik dengan perlakuan pelepasan cahaya (Elmo, Cordouan Technologies Bordeaux France). Setetes 5 μl diendapkan dan biarkan teradsorpsi selama 1 menit, kemudian kelebihan larutan dihilangkan dengan selembar kertas saring. Pengamatan sistem nano PS-PPO-PNIPAM dilakukan pada dua TEM, Tecnai G2 atau CM12 (FEI, Eindhoven, Belanda), dan gambar diperoleh dengan kamera ssCCD Eagle pada Tecnai dan Kamera Megaview SIS pada CM12. Terlihat dari Gambar 2 bahwa sistem nano hibrida yang diperoleh terdiri dari beberapa NP PS-PPO sferis terikat; kami percaya bahwa mereka terikat oleh jaring polimer PNIPAM yang terhubung silang. Dengan demikian, nanosistem hibrida PS-PPO-PNIPAM diperoleh.
Pengukuran Spektral dan Persiapan Sampel
Spektrum serapan diukur menggunakan spektrofotometer Specord M40 (Carl Zeiss, Jerman). Eksitasi fluoresensi dan spektrum emisi didaftarkan dengan bantuan spektrofotometer fluoresen Cary Eclipse (Varian, Australia). Pengukuran penyerapan dan fluoresensi dilakukan dalam sel kuarsa 1 × 1 cm pada suhu kamar. Lima puluh milimolar buffer TRIS-HCl, pH 7,2, digunakan sebagai pelarut. Untuk pengukuran spektral, larutan PS-PPO-PNIPAM hybrid NS yang diperoleh dilarutkan 100 kali dalam buffer. Larutan stok klorin e6 pada konsentrasi 10 mM disiapkan dalam DMF dan selanjutnya diencerkan dalam buffer hingga konsentrasi 1 mM. Alikuot kecil dari larutan 1 mM klorin e6 kemudian ditambahkan 100 kali larutan buffer NS terlarut; konsentrasi akhir klorin e6 adalah 2 μM, dan campuran DMF adalah 0,02%. Eksitasi fluoresensi dan spektrum emisi larutan NS hibrida PS-PPO-PNIPAM dengan klorin e6 diukur dalam 0, 5, 10, 20, 40, 60, 80, dan 100 menit setelah penambahan klorin e6 terhadap solusi PS-PPO-PNIPAM hybrid NS. Dalam waktu hampir 80 menit, kejenuhan tercapai.
Untuk pengukuran yang bergantung pada suhu, larutan PS-PPO-PNIPAM hybrid NS dengan adanya klorin e6 ditempatkan ke dalam dudukan sel termostat (T = 23 °C). Dalam 88 menit setelah persiapan sampel, setelah penyerapan klorin e6 dengan PS-PPO-PNIPAM hybrid NS mencapai saturasi, aliran air dari penangas air dinyalakan dengan memanaskan sampel hingga 39 °C (suhu ini harus melebihi LCST untuk PNIPAM yang terhubung silang). Spektrum eksitasi fluoresensi klorin e6 (emisi pada 680 nm) kemudian diukur dalam interval waktu yang berbeda setelah pemanasan dimulai. Hasil eksperimen menyatakan bahwa transisi konformasi dimulai sekitar 3 menit setelah pemanasan dimulai. Harus disebutkan bahwa dalam waktu sekitar 18 menit setelah pemanasan dimulai, koagulasi NS terjadi memberikan gumpalan makroskopik (yang bagaimanapun menghilang setelah larutan didinginkan, sehingga koagulasi bersifat reversibel). Eksperimen suhu dilakukan tiga kali, dan diperoleh kecenderungan serupa.
Hasil dan Diskusi
Penyerapan, eksitasi fluoresensi, dan spektrum emisi fluoresensi dari sistem nano hibrida PS-PPO-PNIPAM yang diperoleh dalam 50 mM buffer Tris-HCl (pH 7.2) disajikan pada Gambar. 3. Spektrum penyerapan berisi pita yang sesuai dengan stirena (maksimum mendekati 260 nm ) dan PPO (maksimum mendekati 307 nm). Pada saat yang sama, spektrum emisi fluoresensi pada eksitasi pada 250 nm (rentang penyerapan styrene) menghasilkan spektrum yang dimiliki secara eksklusif oleh PPO (dengan maksimum pada 367 nm), sedangkan emisi styrene (karena pada 307 nm [15] ) tidak diamati. Dengan demikian, EEET dari stirena ke PPO yang tergabung hampir selesai. EEET juga didukung oleh spektrum eksitasi emisi PPO (380 nm) di mana pita stirena dekat 260 nm terlihat dengan jelas (Gbr. 3). Harus ditambahkan bahwa struktur vibronik yang jelas dapat diamati pada spektrum emisi PPO (yang tidak diamati untuk larutan air PPO [14]) yang juga menunjukkan penggabungan PPO ke dalam matriks PS.
Penyerapan (garis hitam solid), eksitasi fluoresensi (emisi pada 380 nm, dinormalisasi; garis putus-putus hitam pendek), dan spektrum emisi (eksitasi pada 250 nm, dinormalisasi; garis solid merah) dari sistem nano hibrida PS-PPO-PNIPAM yang diperoleh di 50 mM Tris-HCl buffer (pH 7.2)
Selanjutnya, untuk solusi sistem nano hibrida PS-PPO-PNIPAM yang diperoleh dalam buffer Tris-HCl 50 mM (pH 7.2), fotosensitizer klorin e6 telah ditambahkan. Spektrum penyerapan klorin e6 menunjukkan hampir tidak ada perubahan dalam keberadaan sistem nano hibrida dibandingkan dengan larutan buffer, kecuali sedikit penurunan densitas optik di maxima (Gbr. 4).
Spektrum serapan klorin e6 (2 μM) gratis (garis hitam) dan dengan adanya sistem nano hibrida PS-PPO-PNIPAM (garis merah) dalam buffer Tris-HCl 50 mM, pH 7.2
Pada saat yang sama, efek penambahan klorin e6 untuk PS-PPO-PNIPAM hybrid NS pada spektrum fluoresensi jauh lebih terlihat dibandingkan dengan yang penyerapan. Pertama-tama, adanya klorin e6 mengarah pada pendinginan emisi fluoresen PPO dari NS hibrida PS-PPO-PNIPAM, dan pendinginan ini meningkat selama sekitar satu jam (Gbr. 5). Umumnya, pendinginan tersebut dapat disebabkan oleh EEET (yang akan menyebabkan pendinginan emisi donor pada semua panjang gelombang emisi) atau reabsorpsi (yang akan menyebabkan pendinginan emisi donor pada panjang gelombang penyerapan akseptor). Perbedaan spektrum emisi PPO (Gbr. 5) menunjukkan bahwa segera setelah klorin e6 Selain itu, kontribusi reabsorpsi terhadap pendinginan emisi PPO signifikan (tetapi EEET juga terjadi). Pada saat yang sama, kontribusi reabsorpsi semakin menurun seiring waktu dan EEET ini tumbuh.
Spektrum fluoresensi PS-PPO-PNIPAM hybrid NS free (garis hitam solid) dan penambahan klorin e6 diukur dalam 0 menit (garis putus-putus hitam pendek) dan dalam 80 menit (garis putus-putus hitam). Panjang gelombang eksitasi adalah 250 nm. Lima puluh milimolar buffer Tris-HCl, pH 7,2, digunakan sebagai pelarut. Perbedaan spektrum (garis merah padat, putus-putus, dan putus-putus) menunjukkan kontribusi reabsorpsi dan transfer energi eksitasi elektronik (EEET) terhadap pendinginan emisi
Efek lain dari penambahan klorin e6 untuk PS-PPO-PNIPAM hybrid NS adalah munculnya klorin e6 emisi (saat eksitasi PS pada 250 nm) yang digeser ke wilayah panjang gelombang panjang dibandingkan dengan salah satu klorin e bebas6; intensitas dan shift meningkat seiring waktu dan mencapai saturasi dalam waktu sekitar satu jam (Gbr. 6). Pergeseran ini menunjukkan pengaruh PNIPAM yang mengelilingi molekul terikat klorin e6 . Pada saat yang sama, emisi klorin e6 saat eksitasi ke absorpsinya sendiri (pada 400 nm) hanya sedikit berubah dengan adanya PS-PPO-PNIPAM NS. Bersama dengan perubahan kecil dalam klorin e6 penyerapan (Gbr. 4), ini berarti hanya sebagian kecil klorin e6 molekul terikat pada PS-PPO-PNIPAM NS.
Spektrum fluoresensi klorin e6 gratis dan ditambahkan ke PS-PPO-PNIPAM hybrid NS (diukur dalam 0, 5, 10, 20, 40, dan 80 menit setelah penambahan). Panjang gelombang eksitasi adalah 250 dan 400 nm; Buffer Tris-HCl 50 mM, pH 7,2, digunakan sebagai pelarut. Panah putus-putus pendek menunjukkan spektrum tereksitasi pada 250 dan 400 nm. Tanda panah padat menunjukkan peningkatan waktu (t) setelah penambahan klorin e6 untuk spektrum yang tereksitasi pada 250 nm
Terakhir, pita PS-PPO muncul dalam spektrum eksitasi klorin e6 ditambahkan ke PS-PPO-PNIPAM hybrid NS (emisi pada 680 nm, di mana kontribusi klorin e yang terikat PNIPAM6 terhadap total emisi klorin e6 mendekati maksimum). Pita ini pada awalnya lemah, tetapi selanjutnya, intensitasnya sangat meningkat seiring waktu (Gbr. 7). Pada saat yang sama, pita PS-PPO ini sangat lemah dalam spektrum eksitasi klorin e6 pada emisi pada 660 nm (yaitu, maksimum klorin e6 gratis spektrum) bahkan setelah 100 menit setelah penambahan klorin e6 .
Spektrum eksitasi fluoresensi klorin e6 gratis dan ditambahkan ke NS hybrid PS-PPO-PNIPAM (diukur dalam 0, 10, 80, dan 100 menit setelah penambahan), dan NS hybrid PS-PPO-PNIPAM itu sendiri. Panjang gelombang emisi untuk klorin e6 adalah 660 nm (intensitas dinormalisasi) dan 680 nm. Panjang gelombang emisi untuk PS-PPO-PNIPAM NS adalah 380 nm (intensitas ternormalisasi). Lima puluh milimolar buffer Tris-HCl, pH 7,2, digunakan sebagai pelarut
Jadi, klorin e6 mengikat PS-PPO-PNIPAM hybrid NS yang menyebabkan EEET dari matriks PS dan PPO yang dienkapsulasi menjadi klorin e6 . Efisiensi EEET meningkat seiring waktu (selama sekitar satu jam setelah klorin e6 tambahan), menunjukkan bahwa penyerapan klorin e6 oleh jaringan PNIPAM PS-PPO-PNIPAM hybrid NS masih berlangsung selama ini. Pada saat yang sama, sebagian kecil klorin e6 hadir dalam solusi terikat oleh PNIPAM.
Perlu juga disebutkan bahwa PS-PPO NP terbukti memancarkan fluoresensi PPO [14] atau porfirin yang melekat [13] ketika dieksitasi dengan sinar-X. Jadi, EEET dari PS ke klorin e6 diamati pada PS-PPO-PNIPAM hybrid NS di bawah eksitasi UV PS berarti bahwa energi sinar-X juga dapat ditransfer ke klorin e6 di NS yang dipelajari. Pada saat yang sama, konsentrasi NP PS-PPO yang agak tinggi diperlukan untuk pengamatan langsung emisi terstimulasi sinar-X dari NP tersebut [13, 14]. Salah satu cara untuk meningkatkan sensitivitas NS tersebut terhadap sinar-X adalah dengan menambahkan komponen yang mengandung atom berat.
PNIPAM diketahui mengalami transisi konformasi pada LCST sebesar 32°C. Untuk polimer ikatan silang, nilai LCST harus tetap lebih tinggi. Jika NS hybrid PS-PPO-PNIPAM kami terdiri dari jaringan PNIPAM cross-linked yang mengelilingi NP PS-PPO, dan klorin e6 terikat ke jaringan PNIPAM, kita bisa mengharapkan penurunan PPO-klorin e6 jarak dan dengan demikian meningkatkan efisiensi EEET saat memanaskan seluruh NS hibrida.
Untuk memverifikasi ide ini, efek pemanasan PS-PPO-PNIPAM hybrid NS dengan adanya klorin e6 pada spektrum eksitasi fluoresensi klorin e6 dipelajari. Percobaan pemanasan dilakukan tiga kali; kecenderungan serupa ditunjukkan. Hasil dari salah satu percobaan ini disajikan pada Gambar. 8 dan 9. Dengan demikian, larutan PS-PPO-PNIPAM hybrid NS dengan adanya klorin e6 dipanaskan hingga suhu 39 °C (suhu ini harus melebihi LCST untuk PNIPAM yang terhubung silang); pemanasan dimulai setelah penyerapan klorin e6 dengan PS-PPO-PNIPAM hybrid NS mencapai kejenuhan. Selama pemanasan, rasio klorin e6 intensitas fluoresensi (emisi pada 680 nm) pada eksitasi pada 320 nm (Iex320; itu klorin e6 emisi karena PPO-ke-klorin e6 EEET) dan 404 nm (Iex404; itu klorin e6 emisi pada eksitasi ke pita Soretnya sendiri) dipelajari (Gbr. 8 dan 9); kami yakin rasio ini mencerminkan efisiensi PPO-ke-klorin e6 EEET. Jadi, 3 menit pertama setelah pemanasan dimulai, Iex320 /Akuex404 menurun dari 0,9 menjadi 0,85, mungkin karena penurunan klorin e6 afinitas pengikatan -ke-PNIPAM pada kenaikan suhu. Selanjutnya, nilai Iex320 /Akuex404 rasio meningkat hingga 1,02, yang disertai dengan peningkatan hamburan cahaya (Gbr. 8; hamburan dimanifestasikan sebagai peningkatan intensitas mendekati 660 nm). Hal ini dapat dijelaskan dengan adanya transisi konformasi pada PNIPAM yang mengakibatkan berkurangnya volume jaringan cross-linked PNIPAM. Hal ini menyebabkan berkurangnya jarak antara donor PS-PPO dengan chlorin e6 molekul akseptor terikat pada jaringan PNIPAM dan dengan demikian meningkatkan efisiensi EEET.
Spektrum eksitasi fluoresensi (dinormalisasi pada 404 nm) klorin e6 ditambahkan ke PS-PPO-PNIPAM hybrid NS pada 23 °C (garis hitam) dan pada 39 °C (dalam 14 menit setelah pemanasan dinyalakan; garis merah). Panjang gelombang emisi 680 nm; 50 mM buffer Tris-HCl, pH 7.2, digunakan sebagai pelarut
Ketergantungan pada waktu setelah pemanasan hingga 39 °C diaktifkan dari rasio intensitas emisi klorin e6 ditambahkan ke PS-PPO-PNIPAM hybrid NS pada 680 nm setelah eksitasi pada 320 nm (penyerapan oleh PPO dengan EEET lebih lanjut menjadi klorin e6 ) dengan eksitasi pada 404 nm (eksitasi langsung klorin e6 ). Bilah kesalahan menjelaskan kebisingan dari spektrum eksitasi yang terdaftar
Ringkasnya, proses dalam larutan PS-PPO-PNIPAM hybrid NS dengan adanya klorin e6 tambahan dapat dijelaskan sebagai berikut. Pertama, penambahan klorin e6 ke larutan NS hibrida PS-PPO-PNIPAM dalam buffer (Gbr. 10, proses 1) menyebabkan penetrasi sebagian kecil klorin e6 ke dalam jaringan PNIPAM NS hybrid; ini mengakibatkan EEET dari PS dan PPO menjadi klorin e6 . Penetrasi tersebut berlangsung selama sekitar satu jam disertai dengan peningkatan efisiensi EEET (Gbr. 10, proses 2). Pemanasan sampel lebih lanjut hingga suhu melebihi LCST mengakibatkan transisi konformasi jaringan PNIPAM yang mengarah pada penurunan jarak antara PS-PPO dan klorin e6 molekul, dan dengan demikian masih lebih tinggi peningkatan PS-PPO-ke-klorin e6 Efisiensi EEET (Gbr. 10, proses 3).
Skema proses yang diusulkan dalam larutan PS-PPO-PNIPAM hybrid NS dengan adanya klorin e6 setelah penambahan klorin e6 (proses 1), melewati sekitar 1 jam (proses 2) dan pemanasan lebih lanjut dari 23 hingga 39 °C (proses 3)
Kesimpulan
Studi fluoresen mengungkapkan penyerapan klorin e6 oleh PS-PPO-PNIPAM hybrid NS serta transfer energi eksitasi elektronik dari matriks PS melalui PPO yang dienkapsulasi ke klorin e6; serapan mencapai saturasi dalam waktu sekitar satu jam.
Pemanasan PS-PPO-PNIPAM-klorin e6 NS dari 21 hingga 39 °C menghasilkan peningkatan efisiensi EEET; Hal ini sesuai dengan transisi konformasi PNIPAM yang mengurangi jarak antara donor PS-PPO dan klorin e6 akseptor.
Sedangkan klorin e6 hadir dalam larutan terikat dengan PNIPAM; dengan demikian, studi lebih lanjut ke arah ini diperlukan.
