Nanocarrier Berbasis Nukleosida-Lipid untuk Pengiriman Sorafenib
Abstrak
Meskipun penerapan sorafenib, penghambat kecil protein kinase tirosin, untuk perawatan kanker tetap menjadi pilihan kemoterapi di seluruh dunia, strategi baru diperlukan untuk mengatasi kelarutan air yang rendah (< 5 μM), toksisitas, dan masalah efek samping obat ini. Dalam konteks ini, penggunaan nanocarrier saat ini diselidiki untuk mengatasi kelemahan ini. Dalam kontribusi ini, kami melaporkan jenis baru nanopartikel berbasis sorafenib yang distabilkan oleh lipid nukleosida hibrida. Nanopartikel lipid padat (SLN) menunjukkan nilai potensial zeta negatif atau positif tergantung pada muatan nukleosida-lipid. Mikroskop elektron transmisi SLN bermuatan sorafenib mengungkapkan nanopartikel paralelepiped sekitar 200 nm. Studi biologis yang dicapai pada empat garis sel yang berbeda, termasuk kanker hati dan payudara, mengungkapkan peningkatan aktivitas antikanker dari SLN berbasis Sorafenib dibandingkan dengan obat bebas. Yang penting, gambar mikroskop fase kontras yang direkam setelah inkubasi sel kanker dengan adanya SLN pada konsentrasi tinggi di sorafenib (> 80 μM) mengungkapkan kematian sel kanker total dalam semua kasus. Hasil ini menyoroti potensi SLN berbasis lipid nukleosida sebagai sistem penghantaran obat.
Latar Belakang
Sorafenib yang dikomersialkan dengan nama Nexavar™ adalah penghambat kinase obat hidrofobik [1] yang disetujui untuk pengobatan berbagai kanker manusia, termasuk karsinoma sel ginjal lanjut (RCC) [2], karsinoma hepatoseluler (HCC) [3], dan tiroid lanjut karsinoma. Sorafenib memiliki beberapa target protein kinase yang diketahui, termasuk reseptor transmembran dan tirosin intraseluler dan serin-treonin kinase, dan juga telah terbukti menginduksi apoptosis. Dalam hal mekanisme aksi, sorafenib dilaporkan menghambat pertumbuhan tumor melalui multi target, bekerja langsung pada tumor dan/atau pada angiogenesis tumor (melalui penghambatan sinyal VEGFR dan PDGFR) [4, 5]. Khasiatnya dalam menghambat pertumbuhan sel ganas telah ditunjukkan pada banyak jenis kanker histologis seperti melanoma [6], tiroid [7], pankreas [5], karsinoma hepatoseluler, dan leukemia [8], misalnya. Namun, kelarutan air yang rendah, toksisitas, dan efek samping membatasi penggunaan sorafenib dalam banyak aplikasi klinis. Untuk mengatasi masalah ini, beberapa formulasi sorafenib saat ini sedang diselidiki [9, 10], termasuk nanopartikel kristal cair [11], nanoemulsi [12], nanopartikel silikon berpori termodifikasi siklodekstrin [13], nanokomposit drug-eluting [14], polielektrolit nanopartikel berbasis [15], atau nanopartikel rakitan kurkumin [16]. Namun, nanopartikel lipid (LNs) yang sarat dengan sorafenib telah diselidiki dengan buruk [17, 18].
Di sini, kami melaporkan contoh pertama nanopartikel lipid padat berbasis sorafenib (SLN) [19] yang distabilkan oleh lipid nukleosida [20,21,22]. Studi kromatografi dicapai pada nukleolipid bermuatan positif dan negatif (DOTAU dan diC16 dT, masing-masing) menunjukkan bahwa amfifil ini memiliki stabilitas dan kemurnian yang diminta untuk penggunaannya dalam kerangka aplikasi penghantaran obat [23, 24]. Prosedur nanopresipitasi sederhana memungkinkan pembentukan SLN yang menampilkan salah satu positif (SLN
+
) atau muatan negatif (SLN
−
) (Gbr. 1). Perlu dicatat bahwa semua SLN yang diselidiki meningkatkan efek sitotoksik sorafenib pada karsinoma manusia yang berbeda, menunjukkan bahwa SLN dapat mengatasi keterbatasan sorafenib dalam hal kelarutan air dan aktivitas antikanker.
Skema perumusan SLN. Struktur kimia lipid nukleotida anionik, timidin 3′-(1,2-dipalmitoil-sn -glisero-3-fosfat) (diC16 dT), DOTAU lipid kationik-nukleosida (2′,3′-dioleyl-5′-deoxy-5′-trimethyl-ammonium-uridine), dan sorafenib yang digunakan dalam penelitian ini (kiri). Gambar skema SLN dengan bentuk parallelepiped diperoleh setelah nanopresipitasi nukleolipid (baik diC16 dT atau DOTAU, yang mengarah ke SLN
−
dan SLN
+
, masing-masing) dengan sorafenib (kanan). Representasi skematik diadaptasi dari gambar transmission electronic microscopy (TEM) yang menunjukkan nanopartikel bermuatan sorafenib DOTAU (inset, bar 500 nm)
Metode
Bahan Kimia dan Reagen
Metanol (MeOH), asam format (FA), dan amonium format (AFNH4 ) dibeli dari VWR Chemicals (Prancis) dan semuanya memiliki grade HPLC (kromatografi cair kinerja tinggi). Air tingkat HPLC (resistivitas minimum 18,2 MΩ) diproduksi sendiri oleh sistem ELGA Millipore (Prancis). DOTAU (Nomor CAS:868226-06-6) dan diC16 dT (Nomor CAS:1160002-70-9) disintesis di lab menurut protokol yang dilaporkan dalam Referensi [23,24,25]. Sorafenib, 4-[4-[[4-kloro-3-(trifluorometil)fenil]karbamoy-lamino]fenoksi]-N -methyl-pyridine-2-carboxamide (nomor CAS:284461-73-0) dibeli dari SynVec http://synvec.fr (Ref# D114250414).
Studi Kromatografi
Metode UHPLC (kromatografi cair kinerja ultra tinggi) fase terbalik dikembangkan untuk nukleolipid (DOTAU dan diC16 dT) dan kuantisasi sorafenib di SLN. Sebelum injeksi di HPLC, larutan berair nanopartikel diencerkan dengan etanol dengan faktor 5 dan 10, masing-masing untuk mengukur nukleolipid dan Sorafenib.
Sistem kromatografi UHPLC UltiMate 3000 dari Dionex-Thermo Scientific (AS), terdiri dari pompa dengan sistem katup kuaterner untuk pemilihan kolom, sampel otomatis termostat, dan kompartemen kolom termostat, digunakan. Pemisahan dilakukan dengan kolom Syncronis C18 50 × 2.1 mm, 1.7 μm. Fase gerak terdiri dari 70/30 MeOH/25 mM amonium asetat (pH = 7.4) (A) dan 26,5 mM amonium asetat dalam MeOH (pH = 7.9) (B). Laju aliran 0,2 mL/menit digunakan, dan profil gradien adalah 0–2 menit, 0–100% B; 2–20 mnt, 100% B. Suhu kolom disetel pada 25 °C. Deteksi dilakukan pada 267 nm untuk sorafenib dan diC16 dT dan 257 nm untuk DOTAU. Volume yang disuntikkan adalah 1 μL yang mengarah ke batas kuantitasi 0,6 ng untuk sorafenib dan 15 ng untuk nukleolipid dan DOTAU dan diC16 dT.
Kurva standar untuk sorafenib, DOTAU, dan diC16 dT dalam etanol ditampilkan di File tambahan 1:Gambar SI1, SI2, dan SI3, masing-masing.
Persiapan Nanopartikel Sorafenib
Sepuluh miligram sorafenib dilarutkan dalam 1 mL etanol, dan 10 mg NL (baik diC16 dT atau DOTAU) dilarutkan dalam 1 mL etanol. Seratus mikroliter NL, 100 L larutan sorafenib, dan 800 L etanol dicampur bersama pada suhu kamar dan ditambahkan tetes demi tetes ke dalam 10 ml air suling dengan pengadukan magnetis. Solusinya ditempatkan dalam penangas ultrasonik selama 90 menit pada 25 °C. Etanol dihilangkan di bawah vakum pada 30 °C, dan volume diatur pada 1 mL. Solusi ini disonikasi dua kali dengan menggunakan probe ultrasonik 6 mm (Vibracell 75186) selama 10 menit pada amplitudo 100% dengan pulsa 2 detik setiap 5 detik. Satu mililiter didialisis dengan 30 mL air suling selama 3 × 15 menit. Volume ini disesuaikan pada 2 mL dan disimpan untuk kuantifikasi karakterisasi dan studi stabilitas. Selain itu, eksperimen kontrol diwujudkan dengan protokol yang sama tanpa adanya nukleolipid.
Transmission Electronic Microscopy (TEM dan EDX)
Nanopartikel divisualisasikan dengan mikroskop pewarnaan negatif. Sepuluh mikroliter nanopartikel dipindahkan ke kisi tembaga berlapis karbon selama 10 menit. Sampel kemudian dikeringkan dan diwarnai dengan 2,5% (w /dengan ) uranil asetat dalam air selama 2 menit. Spesimen diamati dengan mikroskop elektron Hitachi H 7650. Spektroskopi sinar-X dispersi energi dilakukan menggunakan mikroskop elektron transmisi TECNAI yang digabungkan dengan Quantax-X-Flash SVE 6.
Ukuran Partikel dan Penentuan Zeta
Zeta partikel dan ukuran ditentukan menggunakan Zetasizer NanoZS, Malvern. Eksperimen diwujudkan dengan 40 μL nanopartikel yang diencerkan dalam 400 μL air, dan pengukuran dilakukan pada 25 °C.
Analisis Sitotoksisitas
HuH7 dan HepG2 ditumbuhkan secara monolayer dalam DMEM-Glutamax yang dilengkapi dengan 10% serum janin betis. MDA-MB-134 dan T-47D ditanam dalam satu lapis di RPMI yang dilengkapi dengan 10% serum janin sapi (hanya untuk T-47D, AA 1X nonesensial, glukosa 0,45%, insulin 10 mg L
−1
, dan natrium piruvat 1X). Semua reagen kultur berasal dari Invitrogen. 10
4
sel/sumur dalam 90 μL media kultur lengkap ditempatkan dalam pelat 96-sumur dan diinkubasi selama 24 jam pada 37 °C dan 5% CO2 , sebelum menambahkan 10 μL SLN atau sorafenib ke dalam media kultur. Sorafenib (nomor CAS:284461-73-0) dilarutkan dalam media kultur dengan 0,1% DMSO. Perhatikan bahwa dalam kondisi ini, konsentrasi maksimum sorafenib tanpa pengendapan adalah 5 M, sedangkan untuk SLN yang dimuat dengan Sorafenib, konsentrasi maksimum yang diuji adalah 120 M tanpa DMSO. Setelah 4 hari inkubasi, viabilitas sel dinilai dengan uji proliferasi berbasis formazan (CellTiter 96® Aqueous One Solution Cell Proliferation Assay kit, Promega), dengan menambahkan 20 μL/sumur larutan reagen. Setelah inkubasi 30 menit pada suhu 37 °C, CO 5%2 , absorbansi masing-masing sumur diukur pada panjang gelombang 492 nm menggunakan spektrofotometer Berthold. Hasil dinyatakan sebagai persentase \( \frac{{\mathrm{OD}}_{492}\ \mathrm{of}\ \mathrm{treated}\ \mathrm{cells}-{\mathrm{OD}}_ {492}\ \mathrm{of}\ \mathrm{blank}}{\ {\mathrm{OD}}_{492}\mathrm{of}\ \mathrm{untreated}\ \mathrm{cells}-{\mathrm {OD}}_{492}\ \mathrm{of}\ \mathrm{blank}} \).
Studi Viabilitas Sel
HuH7 ditanam seperti yang dijelaskan sebelumnya di bagian "Analisis Sitotoksisitas". Viabilitas sel dilakukan setelah 4 hari inkubasi dengan SLN
+
sarat dengan sorafenib pada konsentrasi yang berbeda (0, 1, 5, 10, 25, 50, dan 100 μM) menggunakan uji viabilitas sel hidup/mati (Invitrogen). Secara singkat, media kultur dihilangkan, dan sel-sel yang melekat dicuci sekali dengan Hanks' Balanced Salt Solution (HBSS). Dua ratus mikroliter HBSS yang mengandung 2 μM calcein acetoxymethyl ester dan 4 μM ethidium homodimer-1 ditambahkan ke setiap sumur dan diinkubasi selama 45 menit pada 37 °C dan 5% CO2 . Setelah pewarnaan, sel-sel dicuci sekali dengan HBSS dan dicitrakan secara mikroskopis pada mikroskop fluoresensi terbalik. Persentase sel mati dinilai dengan analisis penyortiran sel yang diaktifkan fluoresensi (FACS). Setelah pewarnaan dengan 4 μM larutan etidium homodimer-1, sel diperlakukan dengan tripsin dan dicuci dua kali dengan fosfat-buffered saline (PBS) dengan sentrifugasi pada 1000 rpm selama 5 menit. Data diperoleh pada flow cytometer LSRFortessa dari Becton Dickinson, dan hasilnya dianalisis menggunakan software DIVA. Sampel sel mati disiapkan menggunakan 70% metanol dan digunakan sebagai kontrol.
Hasil dan Diskusi
Sintesis dan Karakterisasi SLN
Sifat non-toksisitas dan self-assembly dari nukleolipid menjadikannya bahan pembantu amfifilik yang ideal untuk enkapsulasi obat hidrofobik seperti sorafenib. Dalam studi ini, prosedur nanopresipitasi sederhana dikembangkan untuk mengatasi sifat sorafenib kelarutan air yang rendah dan meningkatkan aktivitas antikankernya, yang membatasi dalam banyak kasus penggunaan klinisnya. Mengenai kelarutan air, kami berhipotesis bahwa karakter hidrofobik, heterosiklus, dan fungsi ikatan hidrogen sorafenib akan mendukung interaksi dengan nukleolipid dan pembentukan objek nano. Juga, diharapkan bahwa SLN yang dimuat dengan sorafenib harus meningkatkan aktivitas antitumor dengan meningkatkan serapan sorafenib seluler. Memang, dalam salah satu penelitian kami sebelumnya yang dicapai pada nanopartikel cisplatin, kami menunjukkan bahwa peningkatan aktivitas antitumor cisplatin disebabkan oleh peningkatan jumlah obat yang diinternalisasi ke dalam sel kanker [23] [1]. Proses nanopresipitasi kami melibatkan tiga langkah:(i) pelarutan sorafenib dalam etanol pada 40 °C (10 mg/mL sorafenib, 100 μL) dan penambahan satu ekuivalen nukleolipid (baik anionik nukleotida-lipid, diC16 -3′-dT [timidin 3′-(1,2-dipalmitoil-sn -glisero-3-fosfat)] atau nukleosida-lipid kationik DOTAU [23] [2′,3′-dioleyl-5′ -deoxy-5′-trimethyl-ammonium-uridine], 100 μL larutan pada 10 mg/mL dalam etanol; (ii) 1 mL larutan etanol ditambahkan tetes demi tetes pada suhu kamar ke dalam 10 mL air suling; dan (iii) suspensi yang dihasilkan diuapkan untuk menghilangkan kelebihan etanol dan disonikasi.
Studi Kromatografi
Untuk mengevaluasi kemampuan pemuatan obat dari formulasi baru, metode UHPLC fase terbalik dikembangkan. Dengan menggunakan metode HPLC ini, pemisahan sorafenib dan nukleolipid secara simultan dicapai dalam 12 menit, memungkinkan kuantisasi individu senyawa dalam SLN (File tambahan 1:Gambar SI1–4).
Rasio pemuatan (rasio massa sorafenib/nukleolipid dalam nanopartikel) 50 dan 80% dan hasil enkapsulasi sorafenib sekitar 55 dan 75% diperoleh untuk formulasi yang terdiri dari sorafenib/DOTAU (SLN
+
) dan sorafenib/diC16 dT (SLN
−
), masing-masing. Selama percobaan kontrol yang dilakukan tanpa nukleolipid, sekitar 90% sorafenib hilang selama langkah-langkah formulasi yang berbeda mungkin karena kelarutan sorafenib yang rendah dalam air. Hasil ini menunjukkan bahwa nukleolipid diperlukan untuk melarutkan sorafenib dan menstabilkan SLN.
Studi Fisikokimia
Eksperimen hamburan cahaya dinamis (DLS) dilakukan untuk mengkarakterisasi pembentukan SLN. Baik nukleolipid negatif maupun positif (diC16 dT dan DOTAU) membentuk nanopartikel non-bola serupa dengan bentuk paralelepiped dalam larutan berair dengan monodispersitas (indeks polidispersitas, PDI = 0.202 dan 0.289; ukuran =335,2 dan 304,4 nm, masing-masing, Gambar 2 dan File tambahan 1:Gambar SI7). Seperti yang diharapkan, potensi zeta objek berbasis SLN bergantung pada kepala kutub nukleolipid (ζ = + 59.1 dan 54.9 mV untuk SLN
+
dan SLN
−
, lihat File tambahan 1:Gambar SI10). Kehadiran sorafenib di NP divalidasi oleh pencitraan TEM dan akuisisi EDX dari SLN− diwujudkan dengan akuisisi EDX. Gambar 2e, f menunjukkan titik I dan II. Titik I pada Gambar 2f menunjukkan emisi atom klorin (titik I, Gambar 2e, f) yang menunjukkan adanya sorafenib (lihat struktur kimia Gambar 2f). Perhatikan bahwa klorin hanya ada di titik I dan tidak ada di titik II (Gbr. 2f).
karakterisasi SLN. Gambar mikroskop elektron transmisi (TEM) yang menunjukkan morfologi nanopartikel sorafenib dengan DOTAU (a ) dan sisipan (b ). Contoh SLN berbasis DOTAU yang menampilkan ukuran 327 kali 172 nm (panah), yang mengonfirmasi ukuran rata-rata 304 nm yang diukur dengan DLS (d ). c Contoh gambar TEM yang menunjukkan diC16 dT-SLN (panah 330 kali 500 nm, masing-masing). (e ) Gambar TEM dari SLN-. Spot I &II adalah lokalisasi dimana akuisisi EDX dilakukan. (f ) Spektrum EDX pada posisi I &II. Garis putus-putus menekankan emisi atom klorin, yang hanya ada pada I. Struktur kimia molekul Sorafenib juga disajikan. Kedua spektrum dinormalisasi dengan emisi atom Cu pada 8 keV (karena grid TEM Cu)
Yang penting, dalam eksperimen kontrol, nanopreciptasi sorafenib tanpa adanya nukleolipid tidak memunculkan objek nano apa pun, menunjukkan bahwa nukleolipid memungkinkan pembentukan dan stabilisasi SLN.
Studi Stabilitas
Stabilitas koloid SLN
+
dan SLN
−
diukur dengan DLS dan potensi zeta pada dua suhu (Gbr. 3a dan File tambahan 1:Gambar SI10). Dalam kasus diC16 formulasi berbasis dT, ukuran SLN
−
tidak dimodifikasi setelah 30 hari pada suhu 4 dan 37°C yang menunjukkan stabilitas tinggi dari nanopartikel tersebut (File tambahan 1:Gambar SI9). Stabilitas tersebut dapat dijelaskan oleh sifat interaksi (melibatkan ikatan-H, π -π penumpukan, interaksi pengisian/pengisian) yang terjadi antara diC16 dT dan sorafenib. Namun, untuk formulasi berbasis DOTAU, SLN
+
stabil hanya pada 4 °C selama 30 hari seperti yang diungkapkan oleh studi DLS (Gbr. 3a), sedangkan pada 37 °C, peningkatan ukuran dan PDI diamati (Gbr. 3a). Ketidakstabilan relatif ini diamati pada 37 °C dalam kasus SLN
+
dapat dijelaskan oleh interaksi coulombik tolak yang terjadi antara muatan positif dari kedua sorafenib dan DOTAU. Menariknya, studi stabilitas koloid menunjukkan bahwa dimungkinkan untuk memodulasi stabilitas, maka pengiriman sorafenib dari SLN ke lingkungan fisiologis, tergantung pada nukleolipid yang digunakan untuk stabilisasi SLN. Modulasi stabilitas bisa menarik tergantung pada kinetika pelepasan yang dibutuhkan.
Studi stabilitas SLN. Stabilitas koloid SLN
+
(a ) dan stabilitas kimia sorafenib dan DOTAU dalam SLN
+
versus waktu pada 4 dan 37 °C (b ). PDI, indeks polidispersitas
Sejalan dengan stabilitas koloid, stabilitas kimia sorafenib, DOTAU, dan diC16 dT dalam formulasi berbasis SLN diselidiki sebagai fungsi waktu pada 4 dan 37 °C menggunakan metode kromatografi baru (lihat File tambahan 1:Gambar SI4). Studi kinetik pada kedua suhu ditunjukkan pada Gambar. 3b dan File tambahan 1:SI5 untuk DOTAU-SLN dan diC16 dT-SLN, masing-masing. Hasilnya menunjukkan bahwa sorafenib dan diC16 Molekul dT dalam formulasi tetap stabil selama setidaknya 1 bulan, menunjukkan stabilitas kimia jangka panjang pada kedua suhu dalam kasus SLN
−
. Namun, penurunan DOTAU selama ini diamati di SLN
+
formulasi. Pertama, pada 4 °C, kehilangan sekitar 12% selama 7 hari dan 20% selama 30 hari diukur. Saat meningkatkan suhu, stabilitas DOTAU menurun dengan kehilangan 55% selama 7 hari dan hingga 95% selama 30 hari pada 37°C. Perbedaan stabilitas kimia antara nukleolipid seperti itu telah dibuktikan selama studi stabilitas sebelumnya (lihat File tambahan 1:Gambar SI6).
Studi Biologi
Sitotoksisitas SLN dievaluasi dengan aktivitas metabolisme dan morfologi sel. Uji MTT memungkinkan membandingkan sorafenib bebas (dalam 0,1% DMSO) dan SLN yang dimuat dengan obat (Gbr. 4) pada empat baris sel termasuk dua hepatokarsinoma (HuH7 dan HepG2) dan dua kanker payudara luminal (MDA-MB-134 dan T- 47D). Pertama, pada konsentrasi yang mendekati kelarutan maksimum sorafenib bebas (5 μM sorafenib dalam 0,1% DMSO, 2,8 μM untuk sorafenib/DOTAU, dan 4 μM untuk sorafenib/diC16 dT nanopartikel), kedua SLN menghambat viabilitas sel lebih baik daripada sorafenib gratis. Seperti ditunjukkan pada Gambar. 4b, studi viabilitas sel yang direalisasikan pada sel MDA-MB-134 menunjukkan bahwa aktivitas sorafenib bebas dibatasi oleh kelarutannya dalam air (100% viabilitas sel pada [sorafenib] = 5 μM), sedangkan IC50 nilai 15 dan 50 μM diamati untuk SLN
+
dan SLN
−
, masing-masing (Gbr. 4b). Dalam studi FACS yang dicapai pada HuH7, sebuah IC50 sekitar 50 μM diperoleh (File tambahan 1:Gambar SI12 dan SI13). Gambar mikroskop kontras fase memang menunjukkan penurunan kepadatan lapisan sel yang diobati dengan SLN
−
dan SLN
+
dibandingkan dengan sel yang tidak diberi perlakuan atau sorafenib tanpa perubahan morfologi sel (File tambahan 1:Gambar SI11). Kedua, eksperimen serupa direalisasikan pada konsentrasi SLN yang lebih tinggi ([sorafenib] = 120 dan pada 84 μM untuk SLN
−
dan SLN
+
, masing-masing) dan dibandingkan dengan sorafenib bebas pada batas kelarutannya (konsentrasi 5 μM). Dalam kondisi ini, kedua SLN menunjukkan efek sitotoksik yang kuat pada empat garis sel kanker seperti yang ditunjukkan pada Gambar. 5. Seperti yang terungkap pada gambar mikroskop kontras fase, puing-puing sel diamati untuk kedua SLN
−
(Gbr. 5C1–4) dan SLN
+
(Gbr. 5D1–4) membuktikan kematian sel, sedangkan sel tetap hidup dalam kasus sorafenib bebas (Gbr. 5B1–4). Perlu dicatat bahwa efek sitotoksik yang kuat untuk kedua SLN diamati dalam kasus sel kanker payudara luminal B (Gbr. 5C1-2 dan D1-2). Efek antitumor seperti itu, yang tidak dilaporkan sebelumnya, membuka kemungkinan aplikasi terapeutik baru sorafenib berkat SLN.
Efek sitotoksisitas sorafenib atau SLN. a ) Perbandingan sitotoksisitas dengan Sorafenib bebas atau SLN Sorafenib dalam 4 baris sel (2 kanker payudara luminal B dan 2 hepatokarsinoma) setelah kuantifikasi dengan uji MTS pada 3 sumur pada 5 M Sorafenib bebas, 2,8 M NP Sorafenib/DOTAU (SLN+ ) dan 4 M NP Sorafenib/diC16dT (SLN-). b ) Uji viabilitas sel (sel MDA-MB-134) dengan adanya sorafenib bebas (kelarutan terbatas), SLN+ (abu-abu) atau SLN- (hitam)
Perbandingan morfologi sel antara kontrol, sorafenib bebas, atau SLN. Gambar mikroskop kontras fase menunjukkan sitotoksisitas dalam kondisi berbeda pada empat garis sel karsinoma manusia (hepatokarsinoma, HuH7, HepG2, dan karsinoma payudara luminal MDA-MB-134, T-47D). A) Dengan tidak adanya sorafenib (eksperimen kontrol, A1 –A4 untuk MDA-MB-134, T-47D, HuH7, HepG2, garis sel, masing-masing). B) Sel diinkubasi selama 4 hari dengan adanya 5 M sorafenib gratis. C dan D) sel diinkubasi dengan adanya SLN
−
dan SLN
+
masing-masing pada konsentrasi sorafenib 84 dan 120 μM
Kesimpulan
Kami melaporkan pendekatan baru berdasarkan nukleolipid yang memungkinkan enkapsulasi dan pengiriman sorafenib yang efisien. Investigasi kami menunjukkan pembentukan dua jenis nanopartikel lipid padat (SLN) yang sarat dengan sorafenib. SLN ini, yang menunjukkan nilai potensial zeta negatif atau positif, memiliki bentuk paralelepiped. Seperti yang diungkapkan oleh studi DLS dan HPLC, stabilitas SLN dapat dimodulasi tergantung pada nukleolipid yang digunakan. Yang penting, keduanya SLN
+
dan SLN
−
formulasi mampu meningkatkan kelarutan air sorafenib secara dramatis (konsentrasi lebih tinggi dari 120 M). SLN tersebut menunjukkan aktivitas antitumoral yang lebih baik pada empat garis sel kanker (kanker hati dan payudara) dibandingkan dengan sorafenib bebas, yang terbatas karena kurangnya kelarutannya dalam air. Gambar mikroskop fase kontras, direkam pada empat garis sel kanker, menunjukkan kematian sel yang drastis saat diinkubasi dengan 120 μM SLN
−
atau 84 μM SLN
+
. Oleh karena itu, obat ini dapat digunakan sebagai pilihan terapi baru dalam kasus kanker hati (penggunaan sorafenib dalam kemoterapi intra-arteri, misalnya) atau kanker payudara. Sepengetahuan kami, laporan ini adalah contoh pertama dari penelitian yang menggunakan sorafenib terhadap kanker payudara luminal B yang menunjukkan kegunaan pendekatan SLN. Secara keseluruhan, hasil yang dilaporkan dalam kontribusi ini menyoroti potensi SLN berbasis nukleosida-lipid sebagai sistem penghantaran obat.
